江苏医药
江囌醫藥
강소의약
JIANGSU MEDICAL JOURNAL
2006年
4期
333-336
,共4页
蒋觉安%董万利%胡锦%王元元%惠国桢
蔣覺安%董萬利%鬍錦%王元元%惠國楨
장각안%동만리%호금%왕원원%혜국정
pSUPER质粒%RNA干扰%小干扰RNA%短发夹RNA%血管内皮生长因子
pSUPER質粒%RNA榦擾%小榦擾RNA%短髮夾RNA%血管內皮生長因子
pSUPER질립%RNA간우%소간우RNA%단발협RNA%혈관내피생장인자
目的构建抑制血管内皮生长因子(VEGF)活性的小干扰RNA表达载体.方法构建含有PolⅢ H1启动子的pSUPER-H1质粒,化学合成3对编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,各64个碱基,退火、克隆到经BglⅡ、HindⅢ酶切处理的pSUPER-H1质粒PolⅢ H1启动子下游,获得重组pSUPER-H1-VEGF质粒,转化感受态大肠杆菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒,EcoRⅠ、HindⅢ双酶切电泳、测序鉴定.结果重组质粒经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切琼脂糖凝胶电泳分析,表明64个碱基的核苷酸序列成功插入到预计位点,经测序鉴定,序列完全一致.结论重组pSUPER-H1-VEGF载体成功构建,开展了质粒介导在体内表达siRNA的方法.
目的構建抑製血管內皮生長因子(VEGF)活性的小榦擾RNA錶達載體.方法構建含有PolⅢ H1啟動子的pSUPER-H1質粒,化學閤成3對編碼短髮夾RNA的寡覈苷痠序列,各64箇堿基,退火、剋隆到經BglⅡ、HindⅢ酶切處理的pSUPER-H1質粒PolⅢ H1啟動子下遊,穫得重組pSUPER-H1-VEGF質粒,轉化感受態大腸桿菌,挑選暘性剋隆,抽取重組質粒,EcoRⅠ、HindⅢ雙酶切電泳、測序鑒定.結果重組質粒經EcoRⅠ、HindⅢ雙酶切瓊脂糖凝膠電泳分析,錶明64箇堿基的覈苷痠序列成功插入到預計位點,經測序鑒定,序列完全一緻.結論重組pSUPER-H1-VEGF載體成功構建,開展瞭質粒介導在體內錶達siRNA的方法.
목적구건억제혈관내피생장인자(VEGF)활성적소간우RNA표체재체.방법구건함유PolⅢ H1계동자적pSUPER-H1질립,화학합성3대편마단발협RNA적과핵감산서렬,각64개감기,퇴화、극륭도경BglⅡ、HindⅢ매절처리적pSUPER-H1질립PolⅢ H1계동자하유,획득중조pSUPER-H1-VEGF질립,전화감수태대장간균,도선양성극륭,추취중조질립,EcoRⅠ、HindⅢ쌍매절전영、측서감정.결과중조질립경EcoRⅠ、HindⅢ쌍매절경지당응효전영분석,표명64개감기적핵감산서렬성공삽입도예계위점,경측서감정,서렬완전일치.결론중조pSUPER-H1-VEGF재체성공구건,개전료질립개도재체내표체siRNA적방법.
