细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
3期
371-373,376
,共4页
代忠明%陈苏民%杜可军%陈南春%宋庆贺%骆文静%陈景元
代忠明%陳囌民%杜可軍%陳南春%宋慶賀%駱文靜%陳景元
대충명%진소민%두가군%진남춘%송경하%락문정%진경원
脂多糖应答蛋白%原核表达%多克隆抗体
脂多糖應答蛋白%原覈錶達%多剋隆抗體
지다당응답단백%원핵표체%다극륭항체
目的:原核表达小鼠脂多糖应答蛋白并制备兔抗mLRP抗血清.方法:参考GenBank中已登录的人lrp-cDNA序列,对小鼠的同源表达序列标签(EST)序列进行拼接,预测mlrp cDNA序列.用设计的引物,进行RT-PCR,从脂多糖刺激的NIH3T3细胞中扩增mlrp的cDNA序列,克隆入pTAT载体中,构建mlrp的原核表达载体.以其转化在大肠杆菌中诱导表达后,将获得的His-TAT-mLRP融合蛋白免疫家兔,用丙酮沉淀全菌蛋白吸附法制备纯化的抗mLRP血清,用Western blot鉴定抗体的特异性.结果:预测的mlrp cDNA的长度为1 905 bp.将克隆获得的1 554 bp大小的mlrp-cDNA编码区序列插入pTAT质粒中,在大肠杆菌中表达出His-TAT-mLRP融合蛋白.以其免疫家兔,制备了特异性兔抗mLRP的血清.结论:mlrp的原核表达及特异性兔抗mLRP血清的制备,为进一步研究mLRP的功能奠定了基础.
目的:原覈錶達小鼠脂多糖應答蛋白併製備兔抗mLRP抗血清.方法:參攷GenBank中已登錄的人lrp-cDNA序列,對小鼠的同源錶達序列標籤(EST)序列進行拼接,預測mlrp cDNA序列.用設計的引物,進行RT-PCR,從脂多糖刺激的NIH3T3細胞中擴增mlrp的cDNA序列,剋隆入pTAT載體中,構建mlrp的原覈錶達載體.以其轉化在大腸桿菌中誘導錶達後,將穫得的His-TAT-mLRP融閤蛋白免疫傢兔,用丙酮沉澱全菌蛋白吸附法製備純化的抗mLRP血清,用Western blot鑒定抗體的特異性.結果:預測的mlrp cDNA的長度為1 905 bp.將剋隆穫得的1 554 bp大小的mlrp-cDNA編碼區序列插入pTAT質粒中,在大腸桿菌中錶達齣His-TAT-mLRP融閤蛋白.以其免疫傢兔,製備瞭特異性兔抗mLRP的血清.結論:mlrp的原覈錶達及特異性兔抗mLRP血清的製備,為進一步研究mLRP的功能奠定瞭基礎.
목적:원핵표체소서지다당응답단백병제비토항mLRP항혈청.방법:삼고GenBank중이등록적인lrp-cDNA서렬,대소서적동원표체서렬표첨(EST)서렬진행병접,예측mlrp cDNA서렬.용설계적인물,진행RT-PCR,종지다당자격적NIH3T3세포중확증mlrp적cDNA서렬,극륭입pTAT재체중,구건mlrp적원핵표체재체.이기전화재대장간균중유도표체후,장획득적His-TAT-mLRP융합단백면역가토,용병동침정전균단백흡부법제비순화적항mLRP혈청,용Western blot감정항체적특이성.결과:예측적mlrp cDNA적장도위1 905 bp.장극륭획득적1 554 bp대소적mlrp-cDNA편마구서렬삽입pTAT질립중,재대장간균중표체출His-TAT-mLRP융합단백.이기면역가토,제비료특이성토항mLRP적혈청.결론:mlrp적원핵표체급특이성토항mLRP혈청적제비,위진일보연구mLRP적공능전정료기출.
