中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2006年
3期
228-233
,共6页
楚莉辉%刘龙丁%马绍辉%王丽春%李琦涵
楚莉輝%劉龍丁%馬紹輝%王麗春%李琦涵
초리휘%류룡정%마소휘%왕려춘%리기함
RNA干扰%U6启动子%载体
RNA榦擾%U6啟動子%載體
RNA간우%U6계동자%재체
RNA干扰技术已经成为基因功能研究等领域的有力工具,构建带有筛选标记的siRNA载体可以在细胞中持续抑制靶基因的表达.为了利用RNAi技术开展生物学研究,在克隆载体pUC19的基础上改造构建了人类细胞小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达质粒pUC19NU.该质粒具有新霉素抗性标记和真核细胞复制起点,利用连入的人U6 snRNA启动子起始siRNA的转录.以EGFP和p53为靶基因的干扰实验证明,所构建的siRNA表达质粒可以显著抑制细胞外源性增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)及细胞内源性p53蛋白的表达,而且抑制效果具有特异性.
RNA榦擾技術已經成為基因功能研究等領域的有力工具,構建帶有篩選標記的siRNA載體可以在細胞中持續抑製靶基因的錶達.為瞭利用RNAi技術開展生物學研究,在剋隆載體pUC19的基礎上改造構建瞭人類細胞小榦擾RNA(small interference RNA,siRNA)錶達質粒pUC19NU.該質粒具有新黴素抗性標記和真覈細胞複製起點,利用連入的人U6 snRNA啟動子起始siRNA的轉錄.以EGFP和p53為靶基因的榦擾實驗證明,所構建的siRNA錶達質粒可以顯著抑製細胞外源性增彊綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)及細胞內源性p53蛋白的錶達,而且抑製效果具有特異性.
RNA간우기술이경성위기인공능연구등영역적유력공구,구건대유사선표기적siRNA재체가이재세포중지속억제파기인적표체.위료이용RNAi기술개전생물학연구,재극륭재체pUC19적기출상개조구건료인류세포소간우RNA(small interference RNA,siRNA)표체질립pUC19NU.해질립구유신매소항성표기화진핵세포복제기점,이용련입적인U6 snRNA계동자기시siRNA적전록.이EGFP화p53위파기인적간우실험증명,소구건적siRNA표체질립가이현저억제세포외원성증강록색형광단백(enhanced green fluorescent protein,EGFP)급세포내원성p53단백적표체,이차억제효과구유특이성.
