CAJ | 학술논문

以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL 5'侧翼区-152～+84、-140～+84、-78～+84、-59～+84、-50～+84、-41～+84、-37～+84、-29～+84和-10～+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152～+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152～-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用.
이왕연구발현,재TPA유도영생화식관상피세포암변중중성립세포명효매상관재지단백(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)기인과표체,단과표체궤제불명.최근연구제시,식관암세포NGAL계동자급기린근구역가능존재착TPA반응원건.위료대NGAL적저일TPA반응원건진행경준학정위,채용PCR법결합감투결실실험종식관암세포중극륭료NGAL 5'측익구-152～+84、-140～+84、-78～+84、-59～+84、-50～+84、-41～+84、-37～+84、-29～+84화-10～+84등편단,병정향삽입pGLB、pGLP혹pGLE등형화충형광소매보고기인표체재체중,구건료pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29화pGLB-10등계렬보고기인표체재체.장상술보고기인표체재체분별동pRL-TK공전염식관암세포EC109,병용TPA자격,검측TPA자격전염EC109적상대형광소매활력,종합판정NGAL-152～+84구불동장도편단적TPA반응성,대NGAL계동자구적TPA반응원건급여진일보분단정위.결과표명,NGAL계동자구적TPA반응원건위우-152～-60구단,이차응답TPA자격적반응능력흔강.생물신식학분석결과현시,NGAL계동자구소존재적TPA반응원건흔가능시일충신결구류형.연구설명,NGAL재DNA서렬상유응답TPA자격적결구기출,장유조우심입도분자수평게시TPA유도영생화식관상피세포암변중NGAL과표체궤제,야유조우진일보인식TPA신호세포내전체도경망락재종류발생발전중적작용.