苏州大学学报（医学版）
囌州大學學報（醫學版）
소주대학학보（의학판）
SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE
2006年
1期
48-52
,共5页
董秋明%张光波%徐颖%陈永井%张学光
董鞦明%張光波%徐穎%陳永井%張學光
동추명%장광파%서영%진영정%장학광
4-1BB%基因转染%共刺激分子%T细胞%DCs
4-1BB%基因轉染%共刺激分子%T細胞%DCs
4-1BB%기인전염%공자격분자%T세포%DCs
目的构建人共刺激分子4-1BB转基因细胞并探讨4-1BB的体外生物学功能.方法利用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞总RNA中克隆出人4-1BB基因,经双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,重组逆转录病毒载体4-1BB/pGEZ-Term与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染重新铺板的293T细胞,加入Zeocin选择性培养基进行筛选.经RT-PCR、Western blot、流式细胞仪表型检测等方法鉴定转基因细胞;3H-TdR掺入法分析转基因细胞对T细胞的作用;DCs 培养过程中,加入转基因细胞与激发型CD40单抗5C11,流式细胞仪分析DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达.结果成功构建了能稳定表达人4-1BB蛋白的转基因细胞4-1BB/293T,该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖,可协同5C11促进DCs的体外成熟,上调DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达.结论稳定表达4-1BB蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础.
目的構建人共刺激分子4-1BB轉基因細胞併探討4-1BB的體外生物學功能.方法利用RT-PCR方法從人外週血淋巴細胞總RNA中剋隆齣人4-1BB基因,經雙酶切裝入逆轉錄病毒載體pGEZ-Term中,重組逆轉錄病毒載體4-1BB/pGEZ-Term與兩箇輔助病毒載體用脂質體法共轉染包裝細胞293T,用含有完整病毒顆粒的293T細胞的培養上清感染重新鋪闆的293T細胞,加入Zeocin選擇性培養基進行篩選.經RT-PCR、Western blot、流式細胞儀錶型檢測等方法鑒定轉基因細胞;3H-TdR摻入法分析轉基因細胞對T細胞的作用;DCs 培養過程中,加入轉基因細胞與激髮型CD40單抗5C11,流式細胞儀分析DCs錶麵分子CD80、CD83和CD86的錶達.結果成功構建瞭能穩定錶達人4-1BB蛋白的轉基因細胞4-1BB/293T,該轉基因細胞與T細胞共培養可抑製其體外增殖,可協同5C11促進DCs的體外成熟,上調DCs錶麵分子CD80、CD83和CD86的錶達.結論穩定錶達4-1BB蛋白的轉基因細胞株的建立為該基因功能的後續研究和單剋隆抗體的研製奠定瞭基礎.
목적구건인공자격분자4-1BB전기인세포병탐토4-1BB적체외생물학공능.방법이용RT-PCR방법종인외주혈림파세포총RNA중극륭출인4-1BB기인,경쌍매절장입역전록병독재체pGEZ-Term중,중조역전록병독재체4-1BB/pGEZ-Term여량개보조병독재체용지질체법공전염포장세포293T,용함유완정병독과립적293T세포적배양상청감염중신포판적293T세포,가입Zeocin선택성배양기진행사선.경RT-PCR、Western blot、류식세포의표형검측등방법감정전기인세포;3H-TdR참입법분석전기인세포대T세포적작용;DCs 배양과정중,가입전기인세포여격발형CD40단항5C11,류식세포의분석DCs표면분자CD80、CD83화CD86적표체.결과성공구건료능은정표체인4-1BB단백적전기인세포4-1BB/293T,해전기인세포여T세포공배양가억제기체외증식,가협동5C11촉진DCs적체외성숙,상조DCs표면분자CD80、CD83화CD86적표체.결론은정표체4-1BB단백적전기인세포주적건립위해기인공능적후속연구화단극륭항체적연제전정료기출.
