CAJ | 학술논문

目的:研究重组hCGβ-CTP37(CTP)多聚体编码基因在大肠杆菌BL21中的表达及表达产物多克隆抗体的制备.方法:分别将3、4个CTP编码基因通过串联的方式连接起来组成多聚体编码基因,进而将多聚体基因亚克隆入载体pGEX-4T-2中获得含目的基因的表达质粒pGEX-4T-2-(CTP)n(n=3,4).表达质粒转入大肠杆菌BL21,目的蛋白在IPTG诱导下进行表达.表达产物经谷胱甘肽转硫酶(GST)亲和层析柱纯化、凝血酶酶解去除GST后,获得多肽CTP3和CTP4.将其用于免疫家兔以制备多克隆抗体,并用ELISA法检测抗体滴度.结果:菌株经IPTG诱导后产生了大量可溶性的融合蛋白GST-CTPn(n=3,4),SDS-PAGE分析表明融合蛋白GST-CTP3和GST-CTP4的表观分子量分别为38.0kDa和42.2kDa,纯化后的融合蛋白的纯度达到了90%以上;纯化的融合蛋白经牛凝血酶酶解,利用制备型SDS-PAGE纯化,回收获得的多肽CTP3和CTP4的纯度均大于80%;将多肽CTP3和CTP4多次免疫家兔后,ELISA检测结果证实产生了滴度较高的多克隆抗体.结论:CTP多聚体能刺激家兔产生特异性抗体,这提示CTP多聚体有可能作为避孕疫苗或肿瘤疫苗的免疫原.
목적:연구중조hCGβ-CTP37(CTP)다취체편마기인재대장간균BL21중적표체급표체산물다극륭항체적제비.방법:분별장3、4개CTP편마기인통과천련적방식련접기래조성다취체편마기인,진이장다취체기인아극륭입재체pGEX-4T-2중획득함목적기인적표체질립pGEX-4T-2-(CTP)n(n=3,4).표체질립전입대장간균BL21,목적단백재IPTG유도하진행표체.표체산물경곡광감태전류매(GST)친화층석주순화、응혈매매해거제GST후,획득다태CTP3화CTP4.장기용우면역가토이제비다극륭항체,병용ELISA법검측항체적도.결과:균주경IPTG유도후산생료대량가용성적융합단백GST-CTPn(n=3,4),SDS-PAGE분석표명융합단백GST-CTP3화GST-CTP4적표관분자량분별위38.0kDa화42.2kDa,순화후적융합단백적순도체도료90%이상;순화적융합단백경우응혈매매해,이용제비형SDS-PAGE순화,회수획득적다태CTP3화CTP4적순도균대우80%;장다태CTP3화CTP4다차면역가토후,ELISA검측결과증실산생료적도교고적다극륭항체.결론:CTP다취체능자격가토산생특이성항체,저제시CTP다취체유가능작위피잉역묘혹종류역묘적면역원.