中国现代医学杂志
中國現代醫學雜誌
중국현대의학잡지
CHINA JOURNAL OF MODERN MEDICINE
2005年
6期
851-854,860
,共5页
AFP增强子%逆转录病毒载体%肝癌细胞
AFP增彊子%逆轉錄病毒載體%肝癌細胞
AFP증강자%역전록병독재체%간암세포
目的构建在肝癌细胞中特异性高表达的重组逆转录病毒载体,观察其对体外培养肝癌细胞生物学行为的影响.方法应用DNA重组技术将α-甲胎蛋白强子(AFE)核心区DNA与单纯性疱疹病毒胸苷激酶(TK)基因融合,反向插入逆转录病毒载体pLXSN,重组体命名为pL/TK/AFE/SN;经PA317细胞包装、G418筛选、病毒滴度测定,挑选滴度高的抗性克隆细胞株扩增培养,收获病毒上清,感染体外培养的Hap3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞.用Southern blot、Northern blot检测转染细胞的DNA、mRNA,以羟甲基无环鸟苷(GCV)对细胞的杀伤毒性检测外源基因在转染细胞中的表达.结果酶切及Southern blot证实插入pL/TK/AFE/SN的反义AFE/TK基因大小、方向及克隆位点正确.达到一定的产病毒滴度.Northern blot分析显示Hep3B肝癌细胞有TK基因mRNA水平表达;应用GCV后,导入反义AFE/TK基因的Hep3B肝癌细胞生长明显受抑制(P＜0.01).结论成功构建了含反义AFE/TK基因的重组逆转录病毒载体并包装出具有感染能力的假型逆转录病毒;重组载体所含的反义AFP 强子能调控外源性TK基因特异地在Hep3B肝癌细胞中高表达.
目的構建在肝癌細胞中特異性高錶達的重組逆轉錄病毒載體,觀察其對體外培養肝癌細胞生物學行為的影響.方法應用DNA重組技術將α-甲胎蛋白彊子(AFE)覈心區DNA與單純性皰疹病毒胸苷激酶(TK)基因融閤,反嚮插入逆轉錄病毒載體pLXSN,重組體命名為pL/TK/AFE/SN;經PA317細胞包裝、G418篩選、病毒滴度測定,挑選滴度高的抗性剋隆細胞株擴增培養,收穫病毒上清,感染體外培養的Hap3B肝癌細胞和Hela宮頸癌細胞.用Southern blot、Northern blot檢測轉染細胞的DNA、mRNA,以羥甲基無環鳥苷(GCV)對細胞的殺傷毒性檢測外源基因在轉染細胞中的錶達.結果酶切及Southern blot證實插入pL/TK/AFE/SN的反義AFE/TK基因大小、方嚮及剋隆位點正確.達到一定的產病毒滴度.Northern blot分析顯示Hep3B肝癌細胞有TK基因mRNA水平錶達;應用GCV後,導入反義AFE/TK基因的Hep3B肝癌細胞生長明顯受抑製(P＜0.01).結論成功構建瞭含反義AFE/TK基因的重組逆轉錄病毒載體併包裝齣具有感染能力的假型逆轉錄病毒;重組載體所含的反義AFP 彊子能調控外源性TK基因特異地在Hep3B肝癌細胞中高錶達.
목적구건재간암세포중특이성고표체적중조역전록병독재체,관찰기대체외배양간암세포생물학행위적영향.방법응용DNA중조기술장α-갑태단백강자(AFE)핵심구DNA여단순성포진병독흉감격매(TK)기인융합,반향삽입역전록병독재체pLXSN,중조체명명위pL/TK/AFE/SN;경PA317세포포장、G418사선、병독적도측정,도선적도고적항성극륭세포주확증배양,수획병독상청,감염체외배양적Hap3B간암세포화Hela궁경암세포.용Southern blot、Northern blot검측전염세포적DNA、mRNA,이간갑기무배조감(GCV)대세포적살상독성검측외원기인재전염세포중적표체.결과매절급Southern blot증실삽입pL/TK/AFE/SN적반의AFE/TK기인대소、방향급극륭위점정학.체도일정적산병독적도.Northern blot분석현시Hep3B간암세포유TK기인mRNA수평표체;응용GCV후,도입반의AFE/TK기인적Hep3B간암세포생장명현수억제(P＜0.01).결론성공구건료함반의AFE/TK기인적중조역전록병독재체병포장출구유감염능력적가형역전록병독;중조재체소함적반의AFP 강자능조공외원성TK기인특이지재Hep3B간암세포중고표체.
