中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2003年
3期
338-342
,共5页
李杰%任宏伟%黄洁虹%俞梅敏%茹炳根
李傑%任宏偉%黃潔虹%俞梅敏%茹炳根
리걸%임굉위%황길홍%유매민%여병근
微藻,杜氏盐藻,遗传转化,CaMV 35S,加强型绿色荧光蛋白报告基因
微藻,杜氏鹽藻,遺傳轉化,CaMV 35S,加彊型綠色熒光蛋白報告基因
미조,두씨염조,유전전화,CaMV 35S,가강형록색형광단백보고기인
探索杜氏盐藻(Dunaliella salina)的转基因方法和筛选方法.利用烟草花叶病毒启动子(CaMV 35S)、衣藻叶绿体atpA启动子与来源于水母的加强型绿色荧光蛋白报告基因(EGFP)构建表达载体pART7GFP和pUCGFP,转化盐藻.EGFP在CaMV 35S启动下表达出绿色荧光蛋白,在荧光显微镜下看到发绿色荧光的转基因盐藻.根据荧光数目进行统计,转化效率高于5%.衣藻来源的启动子atpA在盐藻中未能启动EGFP的表达.用直径1 μm的金粉颗粒和0.6 μm的金粉进行基因枪法转化,1 μm的金粉颗粒成功将外源基因导入盐藻,用0.6 μm的金粉配合多种技术参数也没有将外源基因导入盐藻.EGFP可以用作盐藻遗传转化的报告基因使单细胞真核生物盐藻可以利用流式细胞术(FACS)等技术进行筛选,从而避开平板筛选转基因盐藻的限制,并使转基因盐藻实现无抗生素筛选成为可能.
探索杜氏鹽藻(Dunaliella salina)的轉基因方法和篩選方法.利用煙草花葉病毒啟動子(CaMV 35S)、衣藻葉綠體atpA啟動子與來源于水母的加彊型綠色熒光蛋白報告基因(EGFP)構建錶達載體pART7GFP和pUCGFP,轉化鹽藻.EGFP在CaMV 35S啟動下錶達齣綠色熒光蛋白,在熒光顯微鏡下看到髮綠色熒光的轉基因鹽藻.根據熒光數目進行統計,轉化效率高于5%.衣藻來源的啟動子atpA在鹽藻中未能啟動EGFP的錶達.用直徑1 μm的金粉顆粒和0.6 μm的金粉進行基因鎗法轉化,1 μm的金粉顆粒成功將外源基因導入鹽藻,用0.6 μm的金粉配閤多種技術參數也沒有將外源基因導入鹽藻.EGFP可以用作鹽藻遺傳轉化的報告基因使單細胞真覈生物鹽藻可以利用流式細胞術(FACS)等技術進行篩選,從而避開平闆篩選轉基因鹽藻的限製,併使轉基因鹽藻實現無抗生素篩選成為可能.
탐색두씨염조(Dunaliella salina)적전기인방법화사선방법.이용연초화협병독계동자(CaMV 35S)、의조협록체atpA계동자여래원우수모적가강형록색형광단백보고기인(EGFP)구건표체재체pART7GFP화pUCGFP,전화염조.EGFP재CaMV 35S계동하표체출록색형광단백,재형광현미경하간도발록색형광적전기인염조.근거형광수목진행통계,전화효솔고우5%.의조래원적계동자atpA재염조중미능계동EGFP적표체.용직경1 μm적금분과립화0.6 μm적금분진행기인창법전화,1 μm적금분과립성공장외원기인도입염조,용0.6 μm적금분배합다충기술삼수야몰유장외원기인도입염조.EGFP가이용작염조유전전화적보고기인사단세포진핵생물염조가이이용류식세포술(FACS)등기술진행사선,종이피개평판사선전기인염조적한제,병사전기인염조실현무항생소사선성위가능.
