中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2003年
3期
293-296
,共4页
李红乐%邢飞跃%孙学刚%曹永宽%宋革%张秀明%姜勇%李树浓
李紅樂%邢飛躍%孫學剛%曹永寬%宋革%張秀明%薑勇%李樹濃
리홍악%형비약%손학강%조영관%송혁%장수명%강용%리수농
骨髓%干细胞%腺病毒载体%细胞分化%荧光蛋白
骨髓%榦細胞%腺病毒載體%細胞分化%熒光蛋白
골수%간세포%선병독재체%세포분화%형광단백
目的:研究复制缺陷型腺病毒感染骨髓间质干细胞介导外源基因表达的可行性及感染效率.方法:在体外低密度扩增大鼠骨髓间质干细胞(rMSC), 用细菌同源重组法构建巨细胞病毒(CMV)驱动的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因腺病毒载体(pAd-EGFP), 用293包装细胞制备腺病毒,用EGFP重组腺病毒感染rMSC,观察重组腺病毒携带基因在MSC中的感染和表达情况,用细胞计数法和流式细胞仪分析感染效率.用血清撤离加入β-巯基乙醇诱导Ad-EGFP感染的rMSC向神经样细胞定向分化.结果:Ad-EGFP可高效感染rMSC, 感染率为(36±2)%, 而脂质体法转染质粒pTrack-GFP在rMSC转染效率非常低且不易成功; Ad-EGFP感染后的不同扩增代数的rMSC在受到β-巯基乙醇的诱导分化后在荧光显微镜下呈典型的突触形式.免疫组化鉴定发现这些诱导细胞表达神经元特异烯醇化酶(NSE), 表明腺病毒介导外源基因转染后rMSC仍具有分化为神经样细胞的潜能. 结论:腺病毒载体具有较高的介导外源基因表达于rMSC的效率,腺病毒载体介导的EGFP基因能够示踪rMSC分化为神经样细胞的过程.
目的:研究複製缺陷型腺病毒感染骨髓間質榦細胞介導外源基因錶達的可行性及感染效率.方法:在體外低密度擴增大鼠骨髓間質榦細胞(rMSC), 用細菌同源重組法構建巨細胞病毒(CMV)驅動的增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)報告基因腺病毒載體(pAd-EGFP), 用293包裝細胞製備腺病毒,用EGFP重組腺病毒感染rMSC,觀察重組腺病毒攜帶基因在MSC中的感染和錶達情況,用細胞計數法和流式細胞儀分析感染效率.用血清撤離加入β-巰基乙醇誘導Ad-EGFP感染的rMSC嚮神經樣細胞定嚮分化.結果:Ad-EGFP可高效感染rMSC, 感染率為(36±2)%, 而脂質體法轉染質粒pTrack-GFP在rMSC轉染效率非常低且不易成功; Ad-EGFP感染後的不同擴增代數的rMSC在受到β-巰基乙醇的誘導分化後在熒光顯微鏡下呈典型的突觸形式.免疫組化鑒定髮現這些誘導細胞錶達神經元特異烯醇化酶(NSE), 錶明腺病毒介導外源基因轉染後rMSC仍具有分化為神經樣細胞的潛能. 結論:腺病毒載體具有較高的介導外源基因錶達于rMSC的效率,腺病毒載體介導的EGFP基因能夠示蹤rMSC分化為神經樣細胞的過程.
목적:연구복제결함형선병독감염골수간질간세포개도외원기인표체적가행성급감염효솔.방법:재체외저밀도확증대서골수간질간세포(rMSC), 용세균동원중조법구건거세포병독(CMV)구동적증강형록색형광단백(EGFP)보고기인선병독재체(pAd-EGFP), 용293포장세포제비선병독,용EGFP중조선병독감염rMSC,관찰중조선병독휴대기인재MSC중적감염화표체정황,용세포계수법화류식세포의분석감염효솔.용혈청철리가입β-구기을순유도Ad-EGFP감염적rMSC향신경양세포정향분화.결과:Ad-EGFP가고효감염rMSC, 감염솔위(36±2)%, 이지질체법전염질립pTrack-GFP재rMSC전염효솔비상저차불역성공; Ad-EGFP감염후적불동확증대수적rMSC재수도β-구기을순적유도분화후재형광현미경하정전형적돌촉형식.면역조화감정발현저사유도세포표체신경원특이희순화매(NSE), 표명선병독개도외원기인전염후rMSC잉구유분화위신경양세포적잠능. 결론:선병독재체구유교고적개도외원기인표체우rMSC적효솔,선병독재체개도적EGFP기인능구시종rMSC분화위신경양세포적과정.
