生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
1期
74-80
,共7页
曲向华%陈金春%马祺祥%孙世尧%陈国强
麯嚮華%陳金春%馬祺祥%孫世堯%陳國彊
곡향화%진금춘%마기상%손세요%진국강
顺-1,2-二羟基-3,5-环己二烯,甲苯双加氧酶,重组大肠杆菌,生物转化
順-1,2-二羥基-3,5-環己二烯,甲苯雙加氧酶,重組大腸桿菌,生物轉化
순-1,2-이간기-3,5-배기이희,갑분쌍가양매,중조대장간균,생물전화
顺-1,2-二羟基-3,5-环己二烯(简称DHCD)是航天业、电子工业、医药业以及精细化工业上重要的手性化合物.利用重组E.coli JM109 (pKST11),采用适时监测发酵过程中全细胞甲苯双加氧酶(Toluene dioxygenase,TDO)活性的方法,研究了发酵生产DHCD工艺中的重要影响因子IPTG以及底物苯的供给方式对DHCD产量的影响.研究结果表明:(1)发酵初期利用IPTG诱导TDO的表达,不利于细胞生长,在对数生长中期(6或8h),采用0.5mmol/L IPTG即可诱导出TDO的最高表达.(2)发酵液中的苯对全细胞甲苯双加氧酶(TDO)的活性有抑制作用,而利用液体石蜡作为缓释剂进行两相法发酵则降低了苯的毒害,明显提高了DHCD的产量.当采用传统的通气供苯方法,DHCD的产量仅有7.5 g/L;批式添加液体石蜡与苯的混溶物使DHCD的产量提高到22.6 g/L,是通气供苯法的3倍;而采用流加的方式添加液体石蜡与苯的混溶物使DHCD的产量进一步提高到36.8 g/L,是通气供苯法的5倍.证明通过发酵工艺的优化可以解决苯的毒害与苯作为反应底物在水相中需要有一定浓度之间的矛盾,获得较好的转化结果.
順-1,2-二羥基-3,5-環己二烯(簡稱DHCD)是航天業、電子工業、醫藥業以及精細化工業上重要的手性化閤物.利用重組E.coli JM109 (pKST11),採用適時鑑測髮酵過程中全細胞甲苯雙加氧酶(Toluene dioxygenase,TDO)活性的方法,研究瞭髮酵生產DHCD工藝中的重要影響因子IPTG以及底物苯的供給方式對DHCD產量的影響.研究結果錶明:(1)髮酵初期利用IPTG誘導TDO的錶達,不利于細胞生長,在對數生長中期(6或8h),採用0.5mmol/L IPTG即可誘導齣TDO的最高錶達.(2)髮酵液中的苯對全細胞甲苯雙加氧酶(TDO)的活性有抑製作用,而利用液體石蠟作為緩釋劑進行兩相法髮酵則降低瞭苯的毒害,明顯提高瞭DHCD的產量.噹採用傳統的通氣供苯方法,DHCD的產量僅有7.5 g/L;批式添加液體石蠟與苯的混溶物使DHCD的產量提高到22.6 g/L,是通氣供苯法的3倍;而採用流加的方式添加液體石蠟與苯的混溶物使DHCD的產量進一步提高到36.8 g/L,是通氣供苯法的5倍.證明通過髮酵工藝的優化可以解決苯的毒害與苯作為反應底物在水相中需要有一定濃度之間的矛盾,穫得較好的轉化結果.
순-1,2-이간기-3,5-배기이희(간칭DHCD)시항천업、전자공업、의약업이급정세화공업상중요적수성화합물.이용중조E.coli JM109 (pKST11),채용괄시감측발효과정중전세포갑분쌍가양매(Toluene dioxygenase,TDO)활성적방법,연구료발효생산DHCD공예중적중요영향인자IPTG이급저물분적공급방식대DHCD산량적영향.연구결과표명:(1)발효초기이용IPTG유도TDO적표체,불리우세포생장,재대수생장중기(6혹8h),채용0.5mmol/L IPTG즉가유도출TDO적최고표체.(2)발효액중적분대전세포갑분쌍가양매(TDO)적활성유억제작용,이이용액체석사작위완석제진행량상법발효칙강저료분적독해,명현제고료DHCD적산량.당채용전통적통기공분방법,DHCD적산량부유7.5 g/L;비식첨가액체석사여분적혼용물사DHCD적산량제고도22.6 g/L,시통기공분법적3배;이채용류가적방식첨가액체석사여분적혼용물사DHCD적산량진일보제고도36.8 g/L,시통기공분법적5배.증명통과발효공예적우화가이해결분적독해여분작위반응저물재수상중수요유일정농도지간적모순,획득교호적전화결과.
