CAJ | 학술논문

目的利用酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)筛选VeroE6细胞中与汉坦病毒核衣壳蛋白(N蛋白)特异结合的蛋白质基因序列,研究汉坦病毒与其宿主细胞相互作用的机制.方法构建含N蛋白基因的"诱饵"质粒(pGBT9N)和含VroE6细胞基因片段的"猎物"质粒(PATC2).将两种质粒转入到酵母HF7c株,用选择培养基筛选带有两种质粒的克隆株,测定β-半乳糖苷酶(β-Gal)的活性确定pGBT9N质粒的存在.用PCR方法扩增克隆株中VroE6细胞基因片段,根据插入片段的长度及限制性内切酶酶切图谱对所筛选的克隆株进行分组、测序,从人的基因库中查找与插入片段相关的基因序列.结果在筛选出的克隆中,73.5%的克隆所插入的基因与已知的Ubiqutin(泛素)蛋白有很高的同源性(大于99%),l 6.2%的克隆所插入基因与鼠蛋白激酶有约72%的同源性.结论汉坦病毒N蛋白可能与VeroE6细胞中泛素蛋白以及某种蛋白激酶特异性结合,激发并产生某些信号传导,进而使病毒能利用宿主细胞完成其复制释放的功能.有关具体相互作用的机制还有待于进一步研究.
목적이용효모쌍잡교계통(yeast two-hybrid system)사선VeroE6세포중여한탄병독핵의각단백(N단백)특이결합적단백질기인서렬,연구한탄병독여기숙주세포상호작용적궤제.방법구건함N단백기인적"유이"질립(pGBT9N)화함VroE6세포기인편단적"작물"질립(PATC2).장량충질립전입도효모HF7c주,용선택배양기사선대유량충질립적극륭주,측정β-반유당감매(β-Gal)적활성학정pGBT9N질립적존재.용PCR방법확증극륭주중VroE6세포기인편단,근거삽입편단적장도급한제성내절매매절도보대소사선적극륭주진행분조、측서,종인적기인고중사조여삽입편단상관적기인서렬.결과재사선출적극륭중,73.5%적극륭소삽입적기인여이지적Ubiqutin(범소)단백유흔고적동원성(대우99%),l 6.2%적극륭소삽입기인여서단백격매유약72%적동원성.결론한탄병독N단백가능여VeroE6세포중범소단백이급모충단백격매특이성결합,격발병산생모사신호전도,진이사병독능이용숙주세포완성기복제석방적공능.유관구체상호작용적궤제환유대우진일보연구.