药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2002年
5期
256-259
,共4页
屈艺%王正荣%陈立国%刘荣韬%肖静%尹华虎%郭惠玲
屈藝%王正榮%陳立國%劉榮韜%肖靜%尹華虎%郭惠玲
굴예%왕정영%진입국%류영도%초정%윤화호%곽혜령
人激肽释放酶%克隆%真核表达%高血压%CHO细胞
人激肽釋放酶%剋隆%真覈錶達%高血壓%CHO細胞
인격태석방매%극륭%진핵표체%고혈압%CHO세포
为构建人激肽释放酶(human kallikrein,hk)基因真核表达细胞系,从人胎胰中用RT-PCR方法扩增了hk基因全序列及其前导肽序列,克隆到真核表达质粒pCDNA3.1中,得到含全长hk eDNA及其前导肽序列的真核表达质粒pCDNA3-hk,并用脂质体lipofectamine介导其转化到野生型CHO细胞株中,获得了能稳定表达hk蛋白的CHO细胞系CHO-hk.检测CHO细胞及其培养基中hk活性水平及培养基对兔血压的影响.结果表明,97%的hk分泌到细胞外,其中62%左右以活性形式存在,另38%以酶原形式存在.培养基浓缩液具有显著降血压作用.说明CHO-hk细胞系能分泌具完整生物活性的hk,为后续生产治疗高血压的基因工程药物打下了基础.
為構建人激肽釋放酶(human kallikrein,hk)基因真覈錶達細胞繫,從人胎胰中用RT-PCR方法擴增瞭hk基因全序列及其前導肽序列,剋隆到真覈錶達質粒pCDNA3.1中,得到含全長hk eDNA及其前導肽序列的真覈錶達質粒pCDNA3-hk,併用脂質體lipofectamine介導其轉化到野生型CHO細胞株中,穫得瞭能穩定錶達hk蛋白的CHO細胞繫CHO-hk.檢測CHO細胞及其培養基中hk活性水平及培養基對兔血壓的影響.結果錶明,97%的hk分泌到細胞外,其中62%左右以活性形式存在,另38%以酶原形式存在.培養基濃縮液具有顯著降血壓作用.說明CHO-hk細胞繫能分泌具完整生物活性的hk,為後續生產治療高血壓的基因工程藥物打下瞭基礎.
위구건인격태석방매(human kallikrein,hk)기인진핵표체세포계,종인태이중용RT-PCR방법확증료hk기인전서렬급기전도태서렬,극륭도진핵표체질립pCDNA3.1중,득도함전장hk eDNA급기전도태서렬적진핵표체질립pCDNA3-hk,병용지질체lipofectamine개도기전화도야생형CHO세포주중,획득료능은정표체hk단백적CHO세포계CHO-hk.검측CHO세포급기배양기중hk활성수평급배양기대토혈압적영향.결과표명,97%적hk분비도세포외,기중62%좌우이활성형식존재,령38%이매원형식존재.배양기농축액구유현저강혈압작용.설명CHO-hk세포계능분비구완정생물활성적hk,위후속생산치료고혈압적기인공정약물타하료기출.
