药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2002年
4期
191-195
,共5页
细胞毒素%Gelonin%克隆%表达%纯化
細胞毒素%Gelonin%剋隆%錶達%純化
세포독소%Gelonin%극륭%표체%순화
将分别含有细胞毒素gelonin基因片断的重组子pUC-gell和pUC-gelⅡ,按照预先设计的酶切位点,通过亚克隆得到含有gelonin全基因的重组子pUC-gel.然后将pUC-gel与pET28a同时用NdeI/EcoRI双酶切,相关片段构建成表达重组子pET-gel,并进行DNA序列测定.工程菌E.coli B121/pET-gel表达产物经两步SP-Seph-rose柱层析,可得电泳纯的重组gelonin,分子质量为28000 u.无细胞体系蛋白质合成实验表明,其IC50(使蛋白质合成抑制50%所需浓度)为35μg/xg/L.酶联免疫实验为阳性.
將分彆含有細胞毒素gelonin基因片斷的重組子pUC-gell和pUC-gelⅡ,按照預先設計的酶切位點,通過亞剋隆得到含有gelonin全基因的重組子pUC-gel.然後將pUC-gel與pET28a同時用NdeI/EcoRI雙酶切,相關片段構建成錶達重組子pET-gel,併進行DNA序列測定.工程菌E.coli B121/pET-gel錶達產物經兩步SP-Seph-rose柱層析,可得電泳純的重組gelonin,分子質量為28000 u.無細胞體繫蛋白質閤成實驗錶明,其IC50(使蛋白質閤成抑製50%所需濃度)為35μg/xg/L.酶聯免疫實驗為暘性.
장분별함유세포독소gelonin기인편단적중조자pUC-gell화pUC-gelⅡ,안조예선설계적매절위점,통과아극륭득도함유gelonin전기인적중조자pUC-gel.연후장pUC-gel여pET28a동시용NdeI/EcoRI쌍매절,상관편단구건성표체중조자pET-gel,병진행DNA서렬측정.공정균E.coli B121/pET-gel표체산물경량보SP-Seph-rose주층석,가득전영순적중조gelonin,분자질량위28000 u.무세포체계단백질합성실험표명,기IC50(사단백질합성억제50%소수농도)위35μg/xg/L.매련면역실험위양성.
