高技术通讯
高技術通訊
고기술통신
HIGH TECHNOLOGY LETTERS
2003年
6期
30-36
,共7页
杨丽琛%常团结%蔡华雅%陈宛新%杨晓光%朱祯
楊麗琛%常糰結%蔡華雅%陳宛新%楊曉光%硃禎
양려침%상단결%채화아%진완신%양효광%주정
hpt%安全性评价%融合表达%包涵体%可溶表达%活性测定
hpt%安全性評價%融閤錶達%包涵體%可溶錶達%活性測定
hpt%안전성평개%융합표체%포함체%가용표체%활성측정
为对hpt基因编码蛋白进行的安全性评价,建立一种简便、高效的体外微生物表达体系,以获得大量的HPT蛋白,将用于植物转化的hpt基因的全编码序列克隆到原核表达载体pGEX4T-3上,在E.coli BL21中进行诱导表达,所得融合蛋白主要以包涵体的形式存在,且与Glutathione Sephrose 4B纯化介质的结合率不高.后经优化诱导表达的各种条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,该蛋白具有明显的生物活性.经Glutathione Sephrose 4B亲和层析,所得蛋白纯度>95%.动物实验显示,融合蛋白还具有良好的免疫原性,免疫家兔后可诱导产生高滴度的抗体(>1:10000).ELISA及Western blotting检测进一步证实了所获纯化蛋白及其抗体的特性.这为深入进行HPT蛋白的安全性评价打下了良好的基础.
為對hpt基因編碼蛋白進行的安全性評價,建立一種簡便、高效的體外微生物錶達體繫,以穫得大量的HPT蛋白,將用于植物轉化的hpt基因的全編碼序列剋隆到原覈錶達載體pGEX4T-3上,在E.coli BL21中進行誘導錶達,所得融閤蛋白主要以包涵體的形式存在,且與Glutathione Sephrose 4B純化介質的結閤率不高.後經優化誘導錶達的各種條件,成功地穫得瞭可溶性的融閤蛋白,該蛋白具有明顯的生物活性.經Glutathione Sephrose 4B親和層析,所得蛋白純度>95%.動物實驗顯示,融閤蛋白還具有良好的免疫原性,免疫傢兔後可誘導產生高滴度的抗體(>1:10000).ELISA及Western blotting檢測進一步證實瞭所穫純化蛋白及其抗體的特性.這為深入進行HPT蛋白的安全性評價打下瞭良好的基礎.
위대hpt기인편마단백진행적안전성평개,건립일충간편、고효적체외미생물표체체계,이획득대량적HPT단백,장용우식물전화적hpt기인적전편마서렬극륭도원핵표체재체pGEX4T-3상,재E.coli BL21중진행유도표체,소득융합단백주요이포함체적형식존재,차여Glutathione Sephrose 4B순화개질적결합솔불고.후경우화유도표체적각충조건,성공지획득료가용성적융합단백,해단백구유명현적생물활성.경Glutathione Sephrose 4B친화층석,소득단백순도>95%.동물실험현시,융합단백환구유량호적면역원성,면역가토후가유도산생고적도적항체(>1:10000).ELISA급Western blotting검측진일보증실료소획순화단백급기항체적특성.저위심입진행HPT단백적안전성평개타하료량호적기출.
