中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2004年
6期
778-784
,共7页
人可溶性白介素-4受体%pBV220%表达与纯化
人可溶性白介素-4受體%pBV220%錶達與純化
인가용성백개소-4수체%pBV220%표체여순화
白细胞介素-4(IL-4)作为一种多功能的细胞因子在哮喘等变态性炎症反应中具有关键作用.IL-4通过结合细胞表面的白介素-4受体(IL-4R)发挥其生物学效应.sIL-4R缺少跨膜和胞内结构域,结合IL-4后不能产生信号传递介导IL-4的生物学活性,但sIL-4R与IL-4结合的高度特异性和极高的亲和力使它非常适合作为理想的IL-4拮抗剂,应用于哮喘等疾病治疗.采用RT-PCR方法,以人单核细胞总RNA为模板扩增得到编码sIL-4R的基因片段,经测序确证后插入大肠杆菌高效表达质粒pBV220,得到重组质粒pBV220/sIL-4R,重组质粒转化E.coli DH5α.重组菌经温度诱导后超声破碎得到包涵体,经Superdex HR75分子筛柱和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱进行纯化,HPLC检测表明纯度达到90%.N端测序证明,重组sIL-4R与天然sIL-4R N端序列完全一致.Western印迹、配基结合印迹对重组sIL-4R进行鉴定.结果表明,重组sIL-4R具有结合IL-4的生物学活性.
白細胞介素-4(IL-4)作為一種多功能的細胞因子在哮喘等變態性炎癥反應中具有關鍵作用.IL-4通過結閤細胞錶麵的白介素-4受體(IL-4R)髮揮其生物學效應.sIL-4R缺少跨膜和胞內結構域,結閤IL-4後不能產生信號傳遞介導IL-4的生物學活性,但sIL-4R與IL-4結閤的高度特異性和極高的親和力使它非常適閤作為理想的IL-4拮抗劑,應用于哮喘等疾病治療.採用RT-PCR方法,以人單覈細胞總RNA為模闆擴增得到編碼sIL-4R的基因片段,經測序確證後插入大腸桿菌高效錶達質粒pBV220,得到重組質粒pBV220/sIL-4R,重組質粒轉化E.coli DH5α.重組菌經溫度誘導後超聲破碎得到包涵體,經Superdex HR75分子篩柱和DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換柱進行純化,HPLC檢測錶明純度達到90%.N耑測序證明,重組sIL-4R與天然sIL-4R N耑序列完全一緻.Western印跡、配基結閤印跡對重組sIL-4R進行鑒定.結果錶明,重組sIL-4R具有結閤IL-4的生物學活性.
백세포개소-4(IL-4)작위일충다공능적세포인자재효천등변태성염증반응중구유관건작용.IL-4통과결합세포표면적백개소-4수체(IL-4R)발휘기생물학효응.sIL-4R결소과막화포내결구역,결합IL-4후불능산생신호전체개도IL-4적생물학활성,단sIL-4R여IL-4결합적고도특이성화겁고적친화력사타비상괄합작위이상적IL-4길항제,응용우효천등질병치료.채용RT-PCR방법,이인단핵세포총RNA위모판확증득도편마sIL-4R적기인편단,경측서학증후삽입대장간균고효표체질립pBV220,득도중조질립pBV220/sIL-4R,중조질립전화E.coli DH5α.중조균경온도유도후초성파쇄득도포함체,경Superdex HR75분자사주화DEAE-Sepharose Fast Flow리자교환주진행순화,HPLC검측표명순도체도90%.N단측서증명,중조sIL-4R여천연sIL-4R N단서렬완전일치.Western인적、배기결합인적대중조sIL-4R진행감정.결과표명,중조sIL-4R구유결합IL-4적생물학활성.
