氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶Ⅱ的表达纯化及初步活性
안기당감-(3)-을선전이매Ⅱ적표체순화급초보활성
Expression and Purification of AAC(3)-Ⅱ, a Aminoglycoside Acetyltransferase, and Its Activity
  • 万方数据
    细胞生物学杂志 세포생물학잡지
    CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
    2007年 1期 81-85 ,共5页

    王震%陈云波%查长森%邹立林%彭颖%季敬璋%陈秀枢%吕建新

    왕진%진운파%사장삼%추립림%팽영%계경장%진수추%려건신

    氨基糖苷乙酰转移酶%最低抑菌浓度%纯化%氨基糖苷类抗生素 氨基糖苷乙酰轉移酶%最低抑菌濃度%純化%氨基糖苷類抗生素
    안기당감을선전이매%최저억균농도%순화%안기당감류항생소
    用PCR扩增的氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶Ⅱ[aac(3)-Ⅱ]基因构建了能表达较高活性AAC(3)-Ⅱ的重组工程菌,并获取重组AAC(3)-Ⅱ.含pET28a质粒的工程菌转入aac(3)-Ⅱ基因前后对氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度进行比较,重组菌超声裂解上清液及其纯化的AAC(3)-Ⅱ进行SDS-PAGE和Western印迹电泳鉴定.最低抑菌浓度表明转入aac(3)-Ⅱ基因的工程菌比未转入的工程菌对庆大霉素(gentamicin,GEN)的提高了256倍,对妥布霉素(tobramycin,TOB)及其奈替米星(netilmicin,NTL)提高了16倍,电泳鉴定表明纯化获取的是重组AAC(3)-Ⅱ,其相对分子质量约为32 kDa,纯度大于95%,纯化后的10 μg AAC(3)-Ⅱ,分别在10 s内使80 μg GEN、30 s内使80 μgTOB和NTL乙酰化而失去抑菌作用.研究为氨基糖苷类抗生素伴侣的开发研究初步打下基础.
    용PCR확증적안기당감-(3)-을선전이매Ⅱ[aac(3)-Ⅱ]기인구건료능표체교고활성AAC(3)-Ⅱ적중조공정균,병획취중조AAC(3)-Ⅱ.함pET28a질립적공정균전입aac(3)-Ⅱ기인전후대안기당감류항생소적최저억균농도진행비교,중조균초성렬해상청액급기순화적AAC(3)-Ⅱ진행SDS-PAGE화Western인적전영감정.최저억균농도표명전입aac(3)-Ⅱ기인적공정균비미전입적공정균대경대매소(gentamicin,GEN)적제고료256배,대타포매소(tobramycin,TOB)급기내체미성(netilmicin,NTL)제고료16배,전영감정표명순화획취적시중조AAC(3)-Ⅱ,기상대분자질량약위32 kDa,순도대우95%,순화후적10 μg AAC(3)-Ⅱ,분별재10 s내사80 μg GEN、30 s내사80 μgTOB화NTL을선화이실거억균작용.연구위안기당감류항생소반려적개발연구초보타하기출.
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