CAJ | 학술논문

目的:探讨针对HBV preS2基因mRNA翻译起始区的反义锁核酸(LNA)片段在2.2.15细胞内抗HBV复制和表达的作用.方法:分别合成三段互补于HBV preS2基因mRNA翻译起始区同一靶位的反义锁核酸、全硫代反义寡核苷酸、未修饰寡核苷酸及无关对照序列,以阳离子脂质体作为载药体系,作用于HepG22.2.15细胞,采用时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)和荧光定量聚合酶链技术(FQ-PCR)动态检测细胞上清液中HBsAg和HBV DNA的含量,并比较其抑制HBV DNA复制与表达的作用;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测LNA对细胞的毒性.结果:加入LNA后第1天,即出现对HBsAg表达和HBV DNA复制的抑制作用,第7天,未修饰反义寡核苷酸组、全硫代修饰反义寡核苷酸组、反义锁核酸组对HBsAg表达的抑制率分别达45.79%、52.92%和67.21%;对HBVDNA复制的抑制率分别达35.15%、40.69%和52.16%.其中LNA抑制病毒活性最强且对细胞代谢无影响.各组与对照组比较均有显著性差异(均P<0.01),且反义LNA组与其他ASODN组比较也有显著性差异(均P<0.05).结论:针对preS2基因的反义锁核酸体外能有效抑制HBV的复制与表达,故preS2基因可作为乙型肝炎基因治疗的有效靶位.
목적:탐토침대HBV preS2기인mRNA번역기시구적반의쇄핵산(LNA)편단재2.2.15세포내항HBV복제화표체적작용.방법:분별합성삼단호보우HBV preS2기인mRNA번역기시구동일파위적반의쇄핵산、전류대반의과핵감산、미수식과핵감산급무관대조서렬,이양리자지질체작위재약체계,작용우HepG22.2.15세포,채용시간분변면역형광기술(TRFIA)화형광정량취합매련기술(FQ-PCR)동태검측세포상청액중HBsAg화HBV DNA적함량,병비교기억제HBV DNA복제여표체적작용;이사갑기우담서람(MTT)법검측LNA대세포적독성.결과:가입LNA후제1천,즉출현대HBsAg표체화HBV DNA복제적억제작용,제7천,미수식반의과핵감산조、전류대수식반의과핵감산조、반의쇄핵산조대HBsAg표체적억제솔분별체45.79%、52.92%화67.21%;대HBVDNA복제적억제솔분별체35.15%、40.69%화52.16%.기중LNA억제병독활성최강차대세포대사무영향.각조여대조조비교균유현저성차이(균P<0.01),차반의LNA조여기타ASODN조비교야유현저성차이(균P<0.05).결론:침대preS2기인적반의쇄핵산체외능유효억제HBV적복제여표체,고preS2기인가작위을형간염기인치료적유효파위.