中国肝脏病杂志（电子版）
中國肝髒病雜誌（電子版）
중국간장병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF LIVER DISEASES(ELECTRONIC VERSION)
2010年
4期
1-6
,共6页
袁菊%成军%洪源%陶明亮%靳亚平
袁菊%成軍%洪源%陶明亮%靳亞平
원국%성군%홍원%도명량%근아평
p7TP2%原核表达%多克隆抗体%新基因
p7TP2%原覈錶達%多剋隆抗體%新基因
p7TP2%원핵표체%다극륭항체%신기인
目的 应用基因芯片技术筛选获得p7蛋白反式调节的新基因,即丙型肝炎病毒(HCV)p7蛋白反式激活基因p7TP2,研究其生物学功能.方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增其全长cDNA序列,并构建原核表达载体pET-32a(+)-p7TP2,转入大肠埃希菌Rosetta-gami B中,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析在相对分子量约35 kD处有一条特异的蛋白质条带,以包涵体形式表达,并通过蛋白质变性、重折叠及纯化后得到了高纯度融合蛋白,将重组蛋白免疫新西兰大耳白兔,制备抗-p7TP2多克隆抗体.结果 经酶联免疫吸附法(ELISA)测定、蛋白印迹(Western blot)和免疫组织化学鉴定,制备的多克隆抗体具有较高效价和特异性.结论 p7TP2蛋白的表达及多克隆抗体的制备为进一步研究HCVp7TP2蛋白的功能及丙型肝炎的发病机理创造了条件.
目的 應用基因芯片技術篩選穫得p7蛋白反式調節的新基因,即丙型肝炎病毒(HCV)p7蛋白反式激活基因p7TP2,研究其生物學功能.方法 應用聚閤酶鏈反應(PCR)技術擴增其全長cDNA序列,併構建原覈錶達載體pET-32a(+)-p7TP2,轉入大腸埃希菌Rosetta-gami B中,通過異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導錶達重組融閤蛋白,十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)分析在相對分子量約35 kD處有一條特異的蛋白質條帶,以包涵體形式錶達,併通過蛋白質變性、重摺疊及純化後得到瞭高純度融閤蛋白,將重組蛋白免疫新西蘭大耳白兔,製備抗-p7TP2多剋隆抗體.結果 經酶聯免疫吸附法(ELISA)測定、蛋白印跡(Western blot)和免疫組織化學鑒定,製備的多剋隆抗體具有較高效價和特異性.結論 p7TP2蛋白的錶達及多剋隆抗體的製備為進一步研究HCVp7TP2蛋白的功能及丙型肝炎的髮病機理創造瞭條件.
목적 응용기인심편기술사선획득p7단백반식조절적신기인,즉병형간염병독(HCV)p7단백반식격활기인p7TP2,연구기생물학공능.방법 응용취합매련반응(PCR)기술확증기전장cDNA서렬,병구건원핵표체재체pET-32a(+)-p7TP2,전입대장애희균Rosetta-gami B중,통과이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도표체중조융합단백,십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDSPAGE)분석재상대분자량약35 kD처유일조특이적단백질조대,이포함체형식표체,병통과단백질변성、중절첩급순화후득도료고순도융합단백,장중조단백면역신서란대이백토,제비항-p7TP2다극륭항체.결과 경매련면역흡부법(ELISA)측정、단백인적(Western blot)화면역조직화학감정,제비적다극륭항체구유교고효개화특이성.결론 p7TP2단백적표체급다극륭항체적제비위진일보연구HCVp7TP2단백적공능급병형간염적발병궤리창조료조건.
