微生物学杂志
微生物學雜誌
미생물학잡지
JOURNAL OF MICROBIOLOGY
2011年
1期
57-62
,共6页
张磊磊%由鹏飞%姚广新%侯爵%张怡轩
張磊磊%由鵬飛%姚廣新%侯爵%張怡軒
장뢰뢰%유붕비%요엄신%후작%장이헌
结核分枝杆菌%异柠檬酸裂解酶%耻垢分枝杆菌%乙醛酸途径%筛选模型
結覈分枝桿菌%異檸檬痠裂解酶%恥垢分枝桿菌%乙醛痠途徑%篩選模型
결핵분지간균%이저몽산렬해매%치구분지간균%을철산도경%사선모형
为建立基于酶水平和细胞水平的新型抗结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)药物的筛选模型,以M.tuberculosis H37Rv基因组DNA为模板,PCR特异性扩增异柠檬酸裂解酶(ICL)基因,构建表达载体,在E.coli BL21(DE3)中高效表达,使用Ni2+亲和层析柱纯化重组ICL,检测其活性.优化ICL酶反应条件,考察待筛选样品溶剂对酶活性的影响,建立ICL抑制剂酶水平筛选模型;考察与优化耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegma)在以乙酸盐为唯一碳源的培养基中的生长状况,建立基于M.smegma的乙醛酸代谢途径抑制剂的细胞水平筛选模型;利用上述2种筛选模型对1060种可能具有拮抗活性的微生物代谢样品进行初筛和复筛,两者筛选结果正相关性较好.
為建立基于酶水平和細胞水平的新型抗結覈分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)藥物的篩選模型,以M.tuberculosis H37Rv基因組DNA為模闆,PCR特異性擴增異檸檬痠裂解酶(ICL)基因,構建錶達載體,在E.coli BL21(DE3)中高效錶達,使用Ni2+親和層析柱純化重組ICL,檢測其活性.優化ICL酶反應條件,攷察待篩選樣品溶劑對酶活性的影響,建立ICL抑製劑酶水平篩選模型;攷察與優化恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegma)在以乙痠鹽為唯一碳源的培養基中的生長狀況,建立基于M.smegma的乙醛痠代謝途徑抑製劑的細胞水平篩選模型;利用上述2種篩選模型對1060種可能具有拮抗活性的微生物代謝樣品進行初篩和複篩,兩者篩選結果正相關性較好.
위건립기우매수평화세포수평적신형항결핵분지간균(Mycobacterium tuberculosis)약물적사선모형,이M.tuberculosis H37Rv기인조DNA위모판,PCR특이성확증이저몽산렬해매(ICL)기인,구건표체재체,재E.coli BL21(DE3)중고효표체,사용Ni2+친화층석주순화중조ICL,검측기활성.우화ICL매반응조건,고찰대사선양품용제대매활성적영향,건립ICL억제제매수평사선모형;고찰여우화치구분지간균(Mycobacterium smegma)재이을산염위유일탄원적배양기중적생장상황,건립기우M.smegma적을철산대사도경억제제적세포수평사선모형;이용상술2충사선모형대1060충가능구유길항활성적미생물대사양품진행초사화복사,량자사선결과정상관성교호.
