中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
10期
1007-1011
,共5页
孙振璐%宫连凤%刘娟%王志昱%高巧%彭世泽%韩文清
孫振璐%宮連鳳%劉娟%王誌昱%高巧%彭世澤%韓文清
손진로%궁련봉%류연%왕지욱%고교%팽세택%한문청
幽门螺杆菌%乳酸乳球菌%hpaA基因
幽門螺桿菌%乳痠乳毬菌%hpaA基因
유문라간균%유산유구균%hpaA기인
目的 在乳酸菌中表达幽门螺杆菌(HP)hpaA基因,口服免疫小鼠后检测其免疫原性.方法 PCR方法从基因组中扩增基因hpaA,将其克隆至表达载体pNICE:sec,将重组质粒转化乳酸菌NZ9000株,筛选鉴定阳性菌落,诱导表达的hpaA蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.将雌性ICR(CV级)小鼠随机分为4组,分别用PBS、携带空质粒的乳酸菌、携带pNICE:sec-hpaA的乳酸菌、灭活的HP灌胃.免疫7次后检测其特异性IgG和IgA的产生.结果 扩增hpaA基因并构建了重组原核表达质粒pNICE:sec-hpaA,转化乳酸菌NZ9000后经nisin诱导可表达Mr分子量约29 kD的重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白量的9.3%,Western blot分析其能与幽门螺杆菌抗血清特异性反应,具有良好的免疫原性.携带pNICE:sec-hpaA质粒的乳酸菌刺激产生的IgG水平明显高于携带空质粒组,与灭活HP组没有明显的差异,但其刺激产生的IgA水平明显高于其它组(P<0.05).结论 表达hpaA蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后,能够刺激小鼠产生特异的IgG和IgA,可作为幽门螺杆菌口服疫苗候选抗原.为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和HP口服疫苗的开发提供一定的实验基础.
目的 在乳痠菌中錶達幽門螺桿菌(HP)hpaA基因,口服免疫小鼠後檢測其免疫原性.方法 PCR方法從基因組中擴增基因hpaA,將其剋隆至錶達載體pNICE:sec,將重組質粒轉化乳痠菌NZ9000株,篩選鑒定暘性菌落,誘導錶達的hpaA蛋白用SDS-PAGE和Western blot進行鑒定.將雌性ICR(CV級)小鼠隨機分為4組,分彆用PBS、攜帶空質粒的乳痠菌、攜帶pNICE:sec-hpaA的乳痠菌、滅活的HP灌胃.免疫7次後檢測其特異性IgG和IgA的產生.結果 擴增hpaA基因併構建瞭重組原覈錶達質粒pNICE:sec-hpaA,轉化乳痠菌NZ9000後經nisin誘導可錶達Mr分子量約29 kD的重組蛋白,錶達量約佔菌體總蛋白量的9.3%,Western blot分析其能與幽門螺桿菌抗血清特異性反應,具有良好的免疫原性.攜帶pNICE:sec-hpaA質粒的乳痠菌刺激產生的IgG水平明顯高于攜帶空質粒組,與滅活HP組沒有明顯的差異,但其刺激產生的IgA水平明顯高于其它組(P<0.05).結論 錶達hpaA蛋白的乳痠菌口服免疫小鼠後,能夠刺激小鼠產生特異的IgG和IgA,可作為幽門螺桿菌口服疫苗候選抗原.為乳痠菌作為抗原遞送載體的研究和HP口服疫苗的開髮提供一定的實驗基礎.
목적 재유산균중표체유문라간균(HP)hpaA기인,구복면역소서후검측기면역원성.방법 PCR방법종기인조중확증기인hpaA,장기극륭지표체재체pNICE:sec,장중조질립전화유산균NZ9000주,사선감정양성균락,유도표체적hpaA단백용SDS-PAGE화Western blot진행감정.장자성ICR(CV급)소서수궤분위4조,분별용PBS、휴대공질립적유산균、휴대pNICE:sec-hpaA적유산균、멸활적HP관위.면역7차후검측기특이성IgG화IgA적산생.결과 확증hpaA기인병구건료중조원핵표체질립pNICE:sec-hpaA,전화유산균NZ9000후경nisin유도가표체Mr분자량약29 kD적중조단백,표체량약점균체총단백량적9.3%,Western blot분석기능여유문라간균항혈청특이성반응,구유량호적면역원성.휴대pNICE:sec-hpaA질립적유산균자격산생적IgG수평명현고우휴대공질립조,여멸활HP조몰유명현적차이,단기자격산생적IgA수평명현고우기타조(P<0.05).결론 표체hpaA단백적유산균구복면역소서후,능구자격소서산생특이적IgG화IgA,가작위유문라간균구복역묘후선항원.위유산균작위항원체송재체적연구화HP구복역묘적개발제공일정적실험기출.
