山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY
2006年
9期
893-896
,共4页
陈卫%苏踊跃%梁光萍%陈建%张曼辉%罗向东
陳衛%囌踴躍%樑光萍%陳建%張曼輝%囉嚮東
진위%소용약%량광평%진건%장만휘%라향동
抗原,CD29%启动区%遗传载体
抗原,CD29%啟動區%遺傳載體
항원,CD29%계동구%유전재체
目的 克隆β1整合素(CD29)启动子区基因全长序列,构建并鉴定β1整合素启动子全长序列荧光素酶报告基因载体pGL3-β1.方法 以含β1整合素启动子基因全长序列的基因片段(2 735 bp)的重组pGEM-T easy载体为模板,用含有酶切位点的特异性引物扩增出整合素β1启动子基因全长序列1 756 bp,克隆至荧光素酶表达载体pGL3-basic,构建含正确目的 基因的表达载体pGL3-β1,并NheⅠ、XhoⅠ酶切、PCR及测序鉴定;并以该质粒转染人表皮细胞株HaCaT进行活性检测.结果 酶切、PCR及序列测定表明,克隆获得的1 756bp与GenBank DNA序列数据库对比分析序列一致,插入方向正确;且pGL3-β1启动子在人表皮细胞株HaCaT中有明显转录活性.结论 成功构建了β1整合素启动子基因全长序列荧光素酶报告基因载体,为下一步研究人β1整合素启动子的活性分析、基因表达调控机制及其信号转导通路等研究奠定基础.
目的 剋隆β1整閤素(CD29)啟動子區基因全長序列,構建併鑒定β1整閤素啟動子全長序列熒光素酶報告基因載體pGL3-β1.方法 以含β1整閤素啟動子基因全長序列的基因片段(2 735 bp)的重組pGEM-T easy載體為模闆,用含有酶切位點的特異性引物擴增齣整閤素β1啟動子基因全長序列1 756 bp,剋隆至熒光素酶錶達載體pGL3-basic,構建含正確目的 基因的錶達載體pGL3-β1,併NheⅠ、XhoⅠ酶切、PCR及測序鑒定;併以該質粒轉染人錶皮細胞株HaCaT進行活性檢測.結果 酶切、PCR及序列測定錶明,剋隆穫得的1 756bp與GenBank DNA序列數據庫對比分析序列一緻,插入方嚮正確;且pGL3-β1啟動子在人錶皮細胞株HaCaT中有明顯轉錄活性.結論 成功構建瞭β1整閤素啟動子基因全長序列熒光素酶報告基因載體,為下一步研究人β1整閤素啟動子的活性分析、基因錶達調控機製及其信號轉導通路等研究奠定基礎.
목적 극륭β1정합소(CD29)계동자구기인전장서렬,구건병감정β1정합소계동자전장서렬형광소매보고기인재체pGL3-β1.방법 이함β1정합소계동자기인전장서렬적기인편단(2 735 bp)적중조pGEM-T easy재체위모판,용함유매절위점적특이성인물확증출정합소β1계동자기인전장서렬1 756 bp,극륭지형광소매표체재체pGL3-basic,구건함정학목적 기인적표체재체pGL3-β1,병NheⅠ、XhoⅠ매절、PCR급측서감정;병이해질립전염인표피세포주HaCaT진행활성검측.결과 매절、PCR급서렬측정표명,극륭획득적1 756bp여GenBank DNA서렬수거고대비분석서렬일치,삽입방향정학;차pGL3-β1계동자재인표피세포주HaCaT중유명현전록활성.결론 성공구건료β1정합소계동자기인전장서렬형광소매보고기인재체,위하일보연구인β1정합소계동자적활성분석、기인표체조공궤제급기신호전도통로등연구전정기출.
