微生物学杂志
微生物學雜誌
미생물학잡지
JOURNAL OF MICROBIOLOGY
2008年
4期
58-60
,共3页
林维平%刘晓影%武敬亮%高志芹%孙同毅
林維平%劉曉影%武敬亮%高誌芹%孫同毅
림유평%류효영%무경량%고지근%손동의
Trp%Operon%色氨酸%克隆%表达%邻氨基苯甲酸合成酶%色氨酸合成酶
Trp%Operon%色氨痠%剋隆%錶達%鄰氨基苯甲痠閤成酶%色氨痠閤成酶
Trp%Operon%색안산%극륭%표체%린안기분갑산합성매%색안산합성매
色氨酸操纵子所表达酶的高效表达和酶活性的提高,从而构建高产色氨酸菌株.利用PCR的方法从大肠埃希菌基因组中直接克隆色氨酸操纵子,并将其连接到原核表达载体pBV220中,得到重组质粒pBV220-trp operon,转化大肠埃希菌DH5α,温度诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE分析并用比色法测定其活性.通过凝胶电泳观察PCR扩增产物大小约为7 kb.SDS-PAGE鉴定目的蛋白得到了高效表达,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性分别比对照提高了3.4倍和2.5倍.成功构建了重组质粒pBV220-trp operon,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的表达量和表达活性在大肠埃希菌中得到了提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定基础.
色氨痠操縱子所錶達酶的高效錶達和酶活性的提高,從而構建高產色氨痠菌株.利用PCR的方法從大腸埃希菌基因組中直接剋隆色氨痠操縱子,併將其連接到原覈錶達載體pBV220中,得到重組質粒pBV220-trp operon,轉化大腸埃希菌DH5α,溫度誘導重組蛋白錶達,錶達產物經SDS-PAGE分析併用比色法測定其活性.通過凝膠電泳觀察PCR擴增產物大小約為7 kb.SDS-PAGE鑒定目的蛋白得到瞭高效錶達,鄰氨基苯甲痠閤成酶和色氨痠閤成酶的活性分彆比對照提高瞭3.4倍和2.5倍.成功構建瞭重組質粒pBV220-trp operon,鄰氨基苯甲痠閤成酶和色氨痠閤成酶的錶達量和錶達活性在大腸埃希菌中得到瞭提高,為高產色氨痠基因工程菌的構建奠定基礎.
색안산조종자소표체매적고효표체화매활성적제고,종이구건고산색안산균주.이용PCR적방법종대장애희균기인조중직접극륭색안산조종자,병장기련접도원핵표체재체pBV220중,득도중조질립pBV220-trp operon,전화대장애희균DH5α,온도유도중조단백표체,표체산물경SDS-PAGE분석병용비색법측정기활성.통과응효전영관찰PCR확증산물대소약위7 kb.SDS-PAGE감정목적단백득도료고효표체,린안기분갑산합성매화색안산합성매적활성분별비대조제고료3.4배화2.5배.성공구건료중조질립pBV220-trp operon,린안기분갑산합성매화색안산합성매적표체량화표체활성재대장애희균중득도료제고,위고산색안산기인공정균적구건전정기출.
