安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2009年
6期
699-703
,共5页
沈彤%叶良平%汪立杰%张学军%朱启星
瀋彤%葉良平%汪立傑%張學軍%硃啟星
침동%협량평%왕립걸%장학군%주계성
三氯乙烯%半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3%半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9%细胞凋亡
三氯乙烯%半胱氨痠天鼕氨痠蛋白酶3%半胱氨痠天鼕氨痠蛋白酶9%細胞凋亡
삼록을희%반광안산천동안산단백매3%반광안산천동안산단백매9%세포조망
目的 探讨有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡过程中可能的信号通路.方法 用0.125、0.25、015、1.0、2.0 mmol/L的TCE处理NHEK4 h,并培养4、8、12、24 h,分光光度法测上清中Caspase-9和Caspase-3活性,Annexin-V/PI双染后流式细胞仪(FCM)测细胞凋亡;Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK和Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理组,用100 μmol/L ZDEVD-FMK或Z-LEHD-FMK预处理NHEK 1 h,再用2.0mmol/L TCE染毒4 h后培养至12 h.结果不同浓度TCE处理NHEK 4 h后培养不同时间,可诱导Caspase-3和Caspase-9活性升高,培养12、24 h时,各TCE处理组Caspase-3和Caspase-9活性与溶剂对照比差异有统计学意义(P<0.05).不同浓度TCE处理NHEK 4 h后培养12 h.凋亡细胞(Annexin-V+/PI-)所占百分比随TCE剂量增加而升高,除0.125 mmol/L TCE组外,其它各处理组AnnexinV+/PI-细胞所占百分比与对照组比差异均有统计学意义(P<0.05).相关分析显示Annexin-V+/PI-细胞所占百分比与Caspase-3和Caspase-9活性都呈正相关(P<0.05).100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理明显抑制2.0 mmol/L TCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加(P<0.05),对Caspase-9活性影响不明显(P>0.05).100 μmol/L Z-LEHD-FMK预处理不仅抑制2.0mmol/L TCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加,还抑制Caspase-9活性上升(P<0.01).结论 TCE诱导NHEK凋亡中,内部凋亡途径中上游关键酶Caspase-9和下游效应分子Caspase-3均激活.且Caspase-3的激活依赖Casapase-9的活化.
目的 探討有機溶劑三氯乙烯(TCE)誘導正常人錶皮角質形成細胞(NHEK)凋亡過程中可能的信號通路.方法 用0.125、0.25、015、1.0、2.0 mmol/L的TCE處理NHEK4 h,併培養4、8、12、24 h,分光光度法測上清中Caspase-9和Caspase-3活性,Annexin-V/PI雙染後流式細胞儀(FCM)測細胞凋亡;Caspase-3抑製劑Z-DEVD-FMK和Caspase-9抑製劑Z-LEHD-FMK預處理組,用100 μmol/L ZDEVD-FMK或Z-LEHD-FMK預處理NHEK 1 h,再用2.0mmol/L TCE染毒4 h後培養至12 h.結果不同濃度TCE處理NHEK 4 h後培養不同時間,可誘導Caspase-3和Caspase-9活性升高,培養12、24 h時,各TCE處理組Caspase-3和Caspase-9活性與溶劑對照比差異有統計學意義(P<0.05).不同濃度TCE處理NHEK 4 h後培養12 h.凋亡細胞(Annexin-V+/PI-)所佔百分比隨TCE劑量增加而升高,除0.125 mmol/L TCE組外,其它各處理組AnnexinV+/PI-細胞所佔百分比與對照組比差異均有統計學意義(P<0.05).相關分析顯示Annexin-V+/PI-細胞所佔百分比與Caspase-3和Caspase-9活性都呈正相關(P<0.05).100 μmol/L Z-DEVD-FMK預處理明顯抑製2.0 mmol/L TCE誘導的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-細胞所佔百分比的增加(P<0.05),對Caspase-9活性影響不明顯(P>0.05).100 μmol/L Z-LEHD-FMK預處理不僅抑製2.0mmol/L TCE誘導的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-細胞所佔百分比的增加,還抑製Caspase-9活性上升(P<0.01).結論 TCE誘導NHEK凋亡中,內部凋亡途徑中上遊關鍵酶Caspase-9和下遊效應分子Caspase-3均激活.且Caspase-3的激活依賴Casapase-9的活化.
목적 탐토유궤용제삼록을희(TCE)유도정상인표피각질형성세포(NHEK)조망과정중가능적신호통로.방법 용0.125、0.25、015、1.0、2.0 mmol/L적TCE처리NHEK4 h,병배양4、8、12、24 h,분광광도법측상청중Caspase-9화Caspase-3활성,Annexin-V/PI쌍염후류식세포의(FCM)측세포조망;Caspase-3억제제Z-DEVD-FMK화Caspase-9억제제Z-LEHD-FMK예처리조,용100 μmol/L ZDEVD-FMK혹Z-LEHD-FMK예처리NHEK 1 h,재용2.0mmol/L TCE염독4 h후배양지12 h.결과불동농도TCE처리NHEK 4 h후배양불동시간,가유도Caspase-3화Caspase-9활성승고,배양12、24 h시,각TCE처리조Caspase-3화Caspase-9활성여용제대조비차이유통계학의의(P<0.05).불동농도TCE처리NHEK 4 h후배양12 h.조망세포(Annexin-V+/PI-)소점백분비수TCE제량증가이승고,제0.125 mmol/L TCE조외,기타각처리조AnnexinV+/PI-세포소점백분비여대조조비차이균유통계학의의(P<0.05).상관분석현시Annexin-V+/PI-세포소점백분비여Caspase-3화Caspase-9활성도정정상관(P<0.05).100 μmol/L Z-DEVD-FMK예처리명현억제2.0 mmol/L TCE유도적Caspase-3활성상승화Annexin-V+/PI-세포소점백분비적증가(P<0.05),대Caspase-9활성영향불명현(P>0.05).100 μmol/L Z-LEHD-FMK예처리불부억제2.0mmol/L TCE유도적Caspase-3활성상승화Annexin-V+/PI-세포소점백분비적증가,환억제Caspase-9활성상승(P<0.01).결론 TCE유도NHEK조망중,내부조망도경중상유관건매Caspase-9화하유효응분자Caspase-3균격활.차Caspase-3적격활의뢰Casapase-9적활화.
