蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2011年
3期
435-441
,共7页
韩宏岩%许维岸%刘晶晶%贡成良
韓宏巖%許維岸%劉晶晶%貢成良
한굉암%허유안%류정정%공성량
家蚕%酪氨酸酶%漆酶%分离纯化%酶学动力学特性
傢蠶%酪氨痠酶%漆酶%分離純化%酶學動力學特性
가잠%락안산매%칠매%분리순화%매학동역학특성
酚氧化酶是昆虫黑化反应的关键酶类.采用硫酸铵分级(20%～30%、40%～65%饱和度)沉淀以及ConA Sepharose 4B亲和层析和Sephacryl S-200凝胶过滤的方法,从家蚕蛹表皮样品中分离纯化出酪氨酸酶和漆酶,2种酶的比活力分别达到2 900、1 343 U/mg.经非还原SDS-PAGE电泳和酶学动力学特性分析表明:家蚕表皮酪氨酸酶的分子质量约80 kD,酶蛋白经凝胶电泳分离后用底物酪氨酸和邻苯二酚染色呈现棕褐色条带,该酶与2种底物的米氏常数(Km)分别是16.8 mmol/L和12.5 mmol/L,最适pH分别是6.5和7.5,最适温度均是30℃;家蚕表皮漆酶的分子质量约44kD,酶蛋白经凝胶电泳分离后用底物2,2'-氨基-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸盐)(ABTS)染色呈现蓝绿色,而用酪氨酸染色颜色没有变化,该酶与底物ABTS的Km值是32.7 mmol/L,最适pH5.0,最适温度50℃;酪氨酸酶的热稳定性比漆酶高.研究结果表明,采用硫酸分级沉淀、亲和层析和凝胶过滤方法能从家蚕表皮中分离纯化出漆酶和酪氨酸酶,酶学动力学分析二者对催化底物的特异性有差别,推测它们在家蚕表皮的硬化和黑化过程中发挥不同生理作用.
酚氧化酶是昆蟲黑化反應的關鍵酶類.採用硫痠銨分級(20%～30%、40%～65%飽和度)沉澱以及ConA Sepharose 4B親和層析和Sephacryl S-200凝膠過濾的方法,從傢蠶蛹錶皮樣品中分離純化齣酪氨痠酶和漆酶,2種酶的比活力分彆達到2 900、1 343 U/mg.經非還原SDS-PAGE電泳和酶學動力學特性分析錶明:傢蠶錶皮酪氨痠酶的分子質量約80 kD,酶蛋白經凝膠電泳分離後用底物酪氨痠和鄰苯二酚染色呈現棕褐色條帶,該酶與2種底物的米氏常數(Km)分彆是16.8 mmol/L和12.5 mmol/L,最適pH分彆是6.5和7.5,最適溫度均是30℃;傢蠶錶皮漆酶的分子質量約44kD,酶蛋白經凝膠電泳分離後用底物2,2'-氨基-二(3-乙基苯併噻唑啉-6-磺痠鹽)(ABTS)染色呈現藍綠色,而用酪氨痠染色顏色沒有變化,該酶與底物ABTS的Km值是32.7 mmol/L,最適pH5.0,最適溫度50℃;酪氨痠酶的熱穩定性比漆酶高.研究結果錶明,採用硫痠分級沉澱、親和層析和凝膠過濾方法能從傢蠶錶皮中分離純化齣漆酶和酪氨痠酶,酶學動力學分析二者對催化底物的特異性有差彆,推測它們在傢蠶錶皮的硬化和黑化過程中髮揮不同生理作用.
분양화매시곤충흑화반응적관건매류.채용류산안분급(20%～30%、40%～65%포화도)침정이급ConA Sepharose 4B친화층석화Sephacryl S-200응효과려적방법,종가잠용표피양품중분리순화출락안산매화칠매,2충매적비활력분별체도2 900、1 343 U/mg.경비환원SDS-PAGE전영화매학동역학특성분석표명:가잠표피락안산매적분자질량약80 kD,매단백경응효전영분리후용저물락안산화린분이분염색정현종갈색조대,해매여2충저물적미씨상수(Km)분별시16.8 mmol/L화12.5 mmol/L,최괄pH분별시6.5화7.5,최괄온도균시30℃;가잠표피칠매적분자질량약44kD,매단백경응효전영분리후용저물2,2'-안기-이(3-을기분병새서람-6-광산염)(ABTS)염색정현람록색,이용락안산염색안색몰유변화,해매여저물ABTS적Km치시32.7 mmol/L,최괄pH5.0,최괄온도50℃;락안산매적열은정성비칠매고.연구결과표명,채용류산분급침정、친화층석화응효과려방법능종가잠표피중분리순화출칠매화락안산매,매학동역학분석이자대최화저물적특이성유차별,추측타문재가잠표피적경화화흑화과정중발휘불동생리작용.
