CAJ | 학술논문

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为心肌细胞的可行性.方法取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养BMSCs,应用bFGF对其定向诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测结蛋白(desmin)、α-横纹肌肌动蛋白(α-actin)、心肌特异性肌钙蛋白(C-TnT)的表达,透射电镜观察分化细胞的超微结构变化.在诱导后7d、21d和28d,3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子GATA4和心肌特异性α肌球蛋白重链(α-MHC)的表达.结果原代细胞培养48 h后,大部分细胞呈梭形成纤维细胞状,并带有 2～3个长的突起,小部分细胞呈扁平形.给予bFGF诱导后,细胞形态发生明显变化,诱导1周的BMSCs体积增大呈肌细胞样短柱状或长梭形,平行排列生长,诱导4周的BMSCs细胞多呈短柱状,相邻细胞紧密接触形成类肌管样结构,排列具有明显的方向性.经bFGF诱导后分化的细胞胞质内desmin、α-actin和C-TnT染色均为阳性,其中α-actin、desmin阳性率较高分别为58.64% 和33.82%,C-TnT阳性率较低为28.94%.激光扫描共焦显微镜观察可见,细胞质内desmin和α-actin的表达呈红色,C-TnT的表达呈绿色,当前两者分别与C-TnT同时被观察时均可见重叠的部位变成黄色.透射电镜观察到分化细胞呈杆状,胞核卵圆形,位于细胞中央,胞质中可见到平行排列的肌丝、大量的粗面内质网和线粒体,富含糖原和核糖体.RT-PCR结果显示,GATA-4于诱导后7d弱表达,21d表达增强,28d表达减弱.心肌特异性α肌球蛋白重链在诱导后7d不表达,21d弱表达,28d表达明显.结论 bFGF可以诱导BMSCs 定向心肌分化,是有效的心肌细胞分化诱导剂.
목적 탐토감성성섬유세포생장인자(bFGF)체외유도골수간충질간세포(BMSCs)분화위심기세포적가행성.방법 취SD대서사지골골수,분리배양BMSCs,응용bFGF대기정향유도,도치상차현미경관찰세포형태학변화,응용면역세포화학、격광소묘공초현미경기술검측결단백(desmin)、α-횡문기기동단백(α-actin)、심기특이성기개단백(C-TnT)적표체,투사전경관찰분화세포적초미결구변화.재유도후7d、21d화28d,3개시간점이반정량RT-PCR방법검측세포심기조기전록인자GATA4화심기특이성α기구단백중련(α-MHC)적표체.결과 원대세포배양48 h후,대부분세포정사형성섬유세포상,병대유 2～3개장적돌기,소부분세포정편평형.급여bFGF유도후,세포형태발생명현변화,유도1주적BMSCs체적증대정기세포양단주상혹장사형,평행배렬생장,유도4주적BMSCs세포다정단주상,상린세포긴밀접촉형성류기관양결구,배렬구유명현적방향성.경bFGF유도후분화적세포포질내desmin、α-actin화C-TnT염색균위양성,기중α-actin、desmin양성솔교고분별위58.64% 화33.82%,C-TnT양성솔교저위28.94%.격광소묘공초현미경관찰가견,세포질내desmin화α-actin적표체정홍색,C-TnT적표체정록색,당전량자분별여C-TnT동시피관찰시균가견중첩적부위변성황색.투사전경관찰도분화세포정간상,포핵란원형,위우세포중앙,포질중가견도평행배렬적기사、대량적조면내질망화선립체,부함당원화핵당체.RT-PCR결과현시,GATA-4우유도후7d약표체,21d표체증강,28d표체감약.심기특이성α기구단백중련재유도후7d불표체,21d약표체,28d표체명현.결론 bFGF가이유도BMSCs 정향심기분화,시유효적심기세포분화유도제.