中国农学通报
中國農學通報
중국농학통보
CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN
2012年
12期
177-181
,共5页
陈立伟%宗晓娟%王文文%王甲威%魏海蓉%徐丽%严雪瑞%刘庆忠
陳立偉%宗曉娟%王文文%王甲威%魏海蓉%徐麗%嚴雪瑞%劉慶忠
진립위%종효연%왕문문%왕갑위%위해용%서려%엄설서%류경충
李矮缩病毒%外壳蛋白%基因克隆%原核表达
李矮縮病毒%外殼蛋白%基因剋隆%原覈錶達
리왜축병독%외각단백%기인극륭%원핵표체
为制备李矮缩病毒(prunus dwarf virus,PDV)抗血清,克隆PDV外壳蛋白(CP)基因,构建原核表达载体,优化蛋白表达条件.以阳性感病甜樱桃叶片为试验材料,提取总RNA,根据PDV CP基因(L28145.1)设计特异引物,RT-PCR方法扩增,克隆、测序,构建原核表达载体pET 30a- PD VCP,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达.PDV CP基因(GenBank登录号:JF333587.1)全长657 bp,编码217个氨基酸,与GenBank其他PDV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89.2％～93.9％,推导的氨基酸序列同源性为97％～99％.根据完整CP基因核苷酸序列构建系统进化树显示:12个PDV分离物可分为3组,泰安分离物与巴西、土耳其等分离物属于Ⅰ组.成功构建原核表达载体pET30a-PDVCP,并在体外条件下诱导表达出融合蛋白.转pET30a-PDVCP载体的大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达分子量约24 kDa的重组蛋白.该重组蛋白在30℃,1.0 mmol/L IPTG、诱导4h表达量最大.
為製備李矮縮病毒(prunus dwarf virus,PDV)抗血清,剋隆PDV外殼蛋白(CP)基因,構建原覈錶達載體,優化蛋白錶達條件.以暘性感病甜櫻桃葉片為試驗材料,提取總RNA,根據PDV CP基因(L28145.1)設計特異引物,RT-PCR方法擴增,剋隆、測序,構建原覈錶達載體pET 30a- PD VCP,在大腸桿菌BL21(DE3)菌株錶達.PDV CP基因(GenBank登錄號:JF333587.1)全長657 bp,編碼217箇氨基痠,與GenBank其他PDV分離物CP基因覈苷痠序列的同源性為89.2％～93.9％,推導的氨基痠序列同源性為97％～99％.根據完整CP基因覈苷痠序列構建繫統進化樹顯示:12箇PDV分離物可分為3組,泰安分離物與巴西、土耳其等分離物屬于Ⅰ組.成功構建原覈錶達載體pET30a-PDVCP,併在體外條件下誘導錶達齣融閤蛋白.轉pET30a-PDVCP載體的大腸桿菌BL21(DE3)菌株錶達分子量約24 kDa的重組蛋白.該重組蛋白在30℃,1.0 mmol/L IPTG、誘導4h錶達量最大.
위제비리왜축병독(prunus dwarf virus,PDV)항혈청,극륭PDV외각단백(CP)기인,구건원핵표체재체,우화단백표체조건.이양성감병첨앵도협편위시험재료,제취총RNA,근거PDV CP기인(L28145.1)설계특이인물,RT-PCR방법확증,극륭、측서,구건원핵표체재체pET 30a- PD VCP,재대장간균BL21(DE3)균주표체.PDV CP기인(GenBank등록호:JF333587.1)전장657 bp,편마217개안기산,여GenBank기타PDV분리물CP기인핵감산서렬적동원성위89.2％～93.9％,추도적안기산서렬동원성위97％～99％.근거완정CP기인핵감산서렬구건계통진화수현시:12개PDV분리물가분위3조,태안분리물여파서、토이기등분리물속우Ⅰ조.성공구건원핵표체재체pET30a-PDVCP,병재체외조건하유도표체출융합단백.전pET30a-PDVCP재체적대장간균BL21(DE3)균주표체분자량약24 kDa적중조단백.해중조단백재30℃,1.0 mmol/L IPTG、유도4h표체량최대.
