中华肿瘤防治杂志
中華腫瘤防治雜誌
중화종류방치잡지
CHINESE JOURNAL OF CANCER PREVENTION AND TREATMENT
2008年
7期
491-493
,共3页
季加忠%周鹤同%陆万明%于佳%杨元强%苏长青
季加忠%週鶴同%陸萬明%于佳%楊元彊%囌長青
계가충%주학동%륙만명%우가%양원강%소장청
肿瘤%端粒%启动区(遗传学)%基因,报告
腫瘤%耑粒%啟動區(遺傳學)%基因,報告
종류%단립%계동구(유전학)%기인,보고
目的:探讨克隆人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子对肿瘤细胞特异性的意义.方法:全基因合成hTERT启动子核心序列TP258,克隆入T载体,构建pUCmT-TP258测序;Sal Ⅰ+BamH Ⅰ酶切pUCmT-TP258,将其片断插入pGL3-Basic/Xho I+Bgl Ⅱ位点,构建pGL3-TP258质粒载体.将pGL3-Basic、pGL3-control和pGL3-TP258转染培养的人结肠癌细胞株(CaCo-2)、人乳腺癌细胞株(MCF-7)、原代肾癌细胞(RCC)和人正常成纤维细胞(UFC、BJ、MRC-5),测定Luciferase活性,计算其相对活性.结果:在端粒酶阳性的肾癌细胞RCC、结肠癌细胞CaCo-2和乳腺癌细胞MCF-7中,TP258启动子相对活性很高,分别为32.40±15.32、37.70±6.38和12.80±7.28;而在正常的UFC、BJ和MRC-5细胞中,TP258活性很低,分别是0.40±0.14、0.26±0.13和0.38±0.05,两组闻差异有统计学意义,P=0.003 5.结论:hTERT核心启动子TP258在肿瘤细胞中活性明显高于在正常细胞中的活性,具有肿瘤特异性.TP258可以介导基因在肿瘤中的定向表达,实现基因表达的靶向性.
目的:探討剋隆人耑粒酶逆轉錄酶(hTERT)啟動子對腫瘤細胞特異性的意義.方法:全基因閤成hTERT啟動子覈心序列TP258,剋隆入T載體,構建pUCmT-TP258測序;Sal Ⅰ+BamH Ⅰ酶切pUCmT-TP258,將其片斷插入pGL3-Basic/Xho I+Bgl Ⅱ位點,構建pGL3-TP258質粒載體.將pGL3-Basic、pGL3-control和pGL3-TP258轉染培養的人結腸癌細胞株(CaCo-2)、人乳腺癌細胞株(MCF-7)、原代腎癌細胞(RCC)和人正常成纖維細胞(UFC、BJ、MRC-5),測定Luciferase活性,計算其相對活性.結果:在耑粒酶暘性的腎癌細胞RCC、結腸癌細胞CaCo-2和乳腺癌細胞MCF-7中,TP258啟動子相對活性很高,分彆為32.40±15.32、37.70±6.38和12.80±7.28;而在正常的UFC、BJ和MRC-5細胞中,TP258活性很低,分彆是0.40±0.14、0.26±0.13和0.38±0.05,兩組聞差異有統計學意義,P=0.003 5.結論:hTERT覈心啟動子TP258在腫瘤細胞中活性明顯高于在正常細胞中的活性,具有腫瘤特異性.TP258可以介導基因在腫瘤中的定嚮錶達,實現基因錶達的靶嚮性.
목적:탐토극륭인단립매역전록매(hTERT)계동자대종류세포특이성적의의.방법:전기인합성hTERT계동자핵심서렬TP258,극륭입T재체,구건pUCmT-TP258측서;Sal Ⅰ+BamH Ⅰ매절pUCmT-TP258,장기편단삽입pGL3-Basic/Xho I+Bgl Ⅱ위점,구건pGL3-TP258질립재체.장pGL3-Basic、pGL3-control화pGL3-TP258전염배양적인결장암세포주(CaCo-2)、인유선암세포주(MCF-7)、원대신암세포(RCC)화인정상성섬유세포(UFC、BJ、MRC-5),측정Luciferase활성,계산기상대활성.결과:재단립매양성적신암세포RCC、결장암세포CaCo-2화유선암세포MCF-7중,TP258계동자상대활성흔고,분별위32.40±15.32、37.70±6.38화12.80±7.28;이재정상적UFC、BJ화MRC-5세포중,TP258활성흔저,분별시0.40±0.14、0.26±0.13화0.38±0.05,량조문차이유통계학의의,P=0.003 5.결론:hTERT핵심계동자TP258재종류세포중활성명현고우재정상세포중적활성,구유종류특이성.TP258가이개도기인재종류중적정향표체,실현기인표체적파향성.
