动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2009年
12期
34-39
,共6页
田纯见%林志雄%罗长保%罗琼%鱼海琼%陈茹%曾碧健
田純見%林誌雄%囉長保%囉瓊%魚海瓊%陳茹%曾碧健
전순견%림지웅%라장보%라경%어해경%진여%증벽건
日本脑炎病毒%环介导逆转录等温扩增%快速检测%荧光定量
日本腦炎病毒%環介導逆轉錄等溫擴增%快速檢測%熒光定量
일본뇌염병독%배개도역전록등온확증%쾌속검측%형광정량
建立日本脑炎病毒一步法实时环介导逆转录等温快速扩增方法.根据日本脑炎病毒序列保守的非结构区基因NS3设计4条特异引物,用于扩增SA14-14-2株、SA103株和GD06株日本脑炎病毒获得成功,在病毒感染的单层细胞和猪体内都可以检出病毒.与常规SYBR GreenI适时荧光RT-PCR方法比较和Ct值分析,用不同稀释度病毒RNA,两者敏感性相似,适时RT-PCR在模板浓度低时结果更稳定.FIP和BIP纯度会影响反应效果,反应时间和模板浓度会影响电泳条带.一般63 ℃~65 ℃ 30 min可出现结果,模板浓度低时要适当延长反应时间.以SYBR GreenI为指示剂,RT-LAMP在63 ℃~65 ℃循环扩增检测日本脑炎病毒,1.5 min/循环,30个循环,Ct值为21.5.提示RT-LAMP方法用于日本脑炎诊断、鉴别,是敏感、可靠、成本低廉的方法,有助于人畜日本脑炎的防控工作.
建立日本腦炎病毒一步法實時環介導逆轉錄等溫快速擴增方法.根據日本腦炎病毒序列保守的非結構區基因NS3設計4條特異引物,用于擴增SA14-14-2株、SA103株和GD06株日本腦炎病毒穫得成功,在病毒感染的單層細胞和豬體內都可以檢齣病毒.與常規SYBR GreenI適時熒光RT-PCR方法比較和Ct值分析,用不同稀釋度病毒RNA,兩者敏感性相似,適時RT-PCR在模闆濃度低時結果更穩定.FIP和BIP純度會影響反應效果,反應時間和模闆濃度會影響電泳條帶.一般63 ℃~65 ℃ 30 min可齣現結果,模闆濃度低時要適噹延長反應時間.以SYBR GreenI為指示劑,RT-LAMP在63 ℃~65 ℃循環擴增檢測日本腦炎病毒,1.5 min/循環,30箇循環,Ct值為21.5.提示RT-LAMP方法用于日本腦炎診斷、鑒彆,是敏感、可靠、成本低廉的方法,有助于人畜日本腦炎的防控工作.
건립일본뇌염병독일보법실시배개도역전록등온쾌속확증방법.근거일본뇌염병독서렬보수적비결구구기인NS3설계4조특이인물,용우확증SA14-14-2주、SA103주화GD06주일본뇌염병독획득성공,재병독감염적단층세포화저체내도가이검출병독.여상규SYBR GreenI괄시형광RT-PCR방법비교화Ct치분석,용불동희석도병독RNA,량자민감성상사,괄시RT-PCR재모판농도저시결과경은정.FIP화BIP순도회영향반응효과,반응시간화모판농도회영향전영조대.일반63 ℃~65 ℃ 30 min가출현결과,모판농도저시요괄당연장반응시간.이SYBR GreenI위지시제,RT-LAMP재63 ℃~65 ℃순배확증검측일본뇌염병독,1.5 min/순배,30개순배,Ct치위21.5.제시RT-LAMP방법용우일본뇌염진단、감별,시민감、가고、성본저렴적방법,유조우인축일본뇌염적방공공작.
