CAJ | 학술논문

背景:胎肝来源肝干细胞作为细胞移植的供体来源具有优势,但有鉴于干细胞特质,其培养困难,传代后易分化生长;且现有干细胞示踪定位技术欠成熟,这些均是制约肝干细胞移植的重要因素.目的:观察原代肝干细胞电转pEGFP-Cl质粒是否能获得稳定表达绿色荧光的肝干细胞.方法:联合机械分离和胶原酶消化法体外分离孕13.5 d SD大鼠胚胎来源肝细胞,应用特异培养基培养分离细胞,随后通过半量换液法纯化出肝干细胞,采用细胞免疫荧光法对贴壁细胞进行鉴定,并用pEGFP-Cl质粒电转染原代肝干细胞后持续表达绿色荧光作示踪定位标志.结果与结论:原代培养的胎肝干细胞24 h后可见细胞半贴壁,形态基本相同, 呈圆形或卵圆形;第2天观察细胞为大小几乎一致的圆形;培养第3天出现一些由3,5 个形态一致的细胞集落, 细胞直径6～10 μm;细胞集落不断增大,至第5天集落中细胞数量增至10个左右,集落由大小不等的致密圆形细胞组成,界限清楚;第8天后细胞呈上皮样铺展;第12天时,细胞变大呈煎蛋样摊开,形态不规则,细胞浆内可见颗粒,生长变得缓慢;传代后细胞扩增速度无明显变化,至第3代仍保持较均一的上皮细胞状;通过细胞免疫荧光法检测出培养第5天的贴壁细胞表达干细胞标志物CD34和胆管细胞标志物CK19;经筛选pEGFP-Cl质粒电转染后的原代肝干细胞能稳定表达绿色荧光.实验成功构建转染了绿色荧光蛋白的肝干细胞.
배경:태간래원간간세포작위세포이식적공체래원구유우세,단유감우간세포특질,기배양곤난,전대후역분화생장;차현유간세포시종정위기술흠성숙,저사균시제약간간세포이식적중요인소.목적:관찰원대간간세포전전pEGFP-Cl질립시부능획득은정표체록색형광적간간세포.방법:연합궤계분리화효원매소화법체외분리잉13.5 d SD대서배태래원간세포,응용특이배양기배양분리세포,수후통과반량환액법순화출간간세포,채용세포면역형광법대첩벽세포진행감정,병용pEGFP-Cl질립전전염원대간간세포후지속표체록색형광작시종정위표지.결과여결론:원대배양적태간간세포24 h후가견세포반첩벽,형태기본상동, 정원형혹란원형;제2천관찰세포위대소궤호일치적원형;배양제3천출현일사유3,5 개형태일치적세포집락, 세포직경6～10 μm;세포집락불단증대,지제5천집락중세포수량증지10개좌우,집락유대소불등적치밀원형세포조성,계한청초;제8천후세포정상피양포전;제12천시,세포변대정전단양탄개,형태불규칙,세포장내가견과립,생장변득완만;전대후세포확증속도무명현변화,지제3대잉보지교균일적상피세포상;통과세포면역형광법검측출배양제5천적첩벽세포표체간세포표지물CD34화담관세포표지물CK19;경사선pEGFP-Cl질립전전염후적원대간간세포능은정표체록색형광.실험성공구건전염료록색형광단백적간간세포.