东南大学学报（医学版）
東南大學學報（醫學版）
동남대학학보（의학판）
JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2011年
2期
306-311
,共6页
李小芳%邓学鹏%王西勇%薛秀蕾%王升兰%沈子龙%奚涛%吴国球
李小芳%鄧學鵬%王西勇%薛秀蕾%王升蘭%瀋子龍%奚濤%吳國毬
리소방%산학붕%왕서용%설수뢰%왕승란%침자룡%해도%오국구
抗菌肽S-thanatin%大肠杆菌%表达纯化%抗菌活性
抗菌肽S-thanatin%大腸桿菌%錶達純化%抗菌活性
항균태S-thanatin%대장간균%표체순화%항균활성
目的:获得重组抗菌肽S-thanatin (Ts) 在大肠杆菌的可溶性表达及分离纯化方法,通过不同方法鉴定Ts的最低抑菌浓度(MIC),揭示不同方法对结果的影响. 方法:利用基因重组手段构建表达质粒pET32a-Ts,转化大肠杆菌BL21(DE3),可溶性表达Ts融合蛋白,利用镍柱亲和层析纯化出融合蛋白,透析以后经凝血酶酶切,再通过葡聚糖凝胶G-50纯化除去融合伴侣TRX,最后冻干精制得到Ts冻干粉.利用玻璃管的常量肉汤稀释法、聚苯乙烯和聚丙烯96孔板的微量肉汤稀释法和MH琼脂打孔法测定阳离子肽Ts的抑菌活性.结果:Ts 在大肠杆菌中成功可溶性表达并获得85%以上纯度的目的蛋白.不同测定方法显示,Ts对同一菌株具有不同的MIC,以常量肉汤稀释法和聚丙烯96孔板的微量肉汤稀释法测定的多肽抑菌活性效果最佳.结论:Ts在工程菌BL21(DE3)中得到高表达,纯化出后具有较高的抑菌生物活性.不同方法测定出差异化MIC表明,阳离子肽Ts的抑菌活性易受实验材料材质影响.
目的:穫得重組抗菌肽S-thanatin (Ts) 在大腸桿菌的可溶性錶達及分離純化方法,通過不同方法鑒定Ts的最低抑菌濃度(MIC),揭示不同方法對結果的影響. 方法:利用基因重組手段構建錶達質粒pET32a-Ts,轉化大腸桿菌BL21(DE3),可溶性錶達Ts融閤蛋白,利用鎳柱親和層析純化齣融閤蛋白,透析以後經凝血酶酶切,再通過葡聚糖凝膠G-50純化除去融閤伴侶TRX,最後凍榦精製得到Ts凍榦粉.利用玻璃管的常量肉湯稀釋法、聚苯乙烯和聚丙烯96孔闆的微量肉湯稀釋法和MH瓊脂打孔法測定暘離子肽Ts的抑菌活性.結果:Ts 在大腸桿菌中成功可溶性錶達併穫得85%以上純度的目的蛋白.不同測定方法顯示,Ts對同一菌株具有不同的MIC,以常量肉湯稀釋法和聚丙烯96孔闆的微量肉湯稀釋法測定的多肽抑菌活性效果最佳.結論:Ts在工程菌BL21(DE3)中得到高錶達,純化齣後具有較高的抑菌生物活性.不同方法測定齣差異化MIC錶明,暘離子肽Ts的抑菌活性易受實驗材料材質影響.
목적:획득중조항균태S-thanatin (Ts) 재대장간균적가용성표체급분리순화방법,통과불동방법감정Ts적최저억균농도(MIC),게시불동방법대결과적영향. 방법:이용기인중조수단구건표체질립pET32a-Ts,전화대장간균BL21(DE3),가용성표체Ts융합단백,이용얼주친화층석순화출융합단백,투석이후경응혈매매절,재통과포취당응효G-50순화제거융합반려TRX,최후동간정제득도Ts동간분.이용파리관적상량육탕희석법、취분을희화취병희96공판적미량육탕희석법화MH경지타공법측정양리자태Ts적억균활성.결과:Ts 재대장간균중성공가용성표체병획득85%이상순도적목적단백.불동측정방법현시,Ts대동일균주구유불동적MIC,이상량육탕희석법화취병희96공판적미량육탕희석법측정적다태억균활성효과최가.결론:Ts재공정균BL21(DE3)중득도고표체,순화출후구유교고적억균생물활성.불동방법측정출차이화MIC표명,양리자태Ts적억균활성역수실험재료재질영향.
