分析化学
分析化學
분석화학
CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY
2011年
7期
1027-1032
,共6页
马丽敏%宋伦%钱俊红%张凌怡%蓝闽波%张维冰
馬麗敏%宋倫%錢俊紅%張凌怡%藍閩波%張維冰
마려민%송륜%전준홍%장릉이%람민파%장유빙
蛋白%多肽%激光诱导荧光%高效液相色谱
蛋白%多肽%激光誘導熒光%高效液相色譜
단백%다태%격광유도형광%고효액상색보
将鼠肝肿瘤组织蛋白及其酶解产物经4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑(NBD-F)在50 mmol/L硼砂缓冲溶液(pH 8.5)中室温避光衍生1h后,采用高效液相色谱-激光诱导荧光检测法(HPLC-LIF)分析(λ(ex)=473nm,λ(em)=525 mn),并与高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)在检测波长214 nm所得结果进行对比.对蛋白质酶解产物的分析结果表明,LIF检测器因其更高的检测灵敏度,可显著提高检测能力,多数色谱峰较紫外信号高10倍以上,最终多检测到42个峰.进一步对鼠肝肿瘤组织蛋白提取液的检测结果进行对比,HPLC-UV法检测到的组分集中在强极性区域,说明样品中极性组分的紫外吸收较强;HPLC-LIF法检测到的组分更多集中在弱极性和非极性区域,一方面因为衍生化能够改变组分的极性,另一方面因为弱极性和非极性组分更容易被衍生化,此结果也说明两种方法对样品的检测选择性存在明显差异.通过改变荧光衍生化反应条件(溶液pH值、缓冲液介质)对复杂样品进行选择性标记,有利于实现对低丰度蛋白和多肽的选择性检测.
將鼠肝腫瘤組織蛋白及其酶解產物經4-氟-7-硝基-2,1,3-苯併氧雜噁二唑(NBD-F)在50 mmol/L硼砂緩遲溶液(pH 8.5)中室溫避光衍生1h後,採用高效液相色譜-激光誘導熒光檢測法(HPLC-LIF)分析(λ(ex)=473nm,λ(em)=525 mn),併與高效液相色譜-紫外檢測法(HPLC-UV)在檢測波長214 nm所得結果進行對比.對蛋白質酶解產物的分析結果錶明,LIF檢測器因其更高的檢測靈敏度,可顯著提高檢測能力,多數色譜峰較紫外信號高10倍以上,最終多檢測到42箇峰.進一步對鼠肝腫瘤組織蛋白提取液的檢測結果進行對比,HPLC-UV法檢測到的組分集中在彊極性區域,說明樣品中極性組分的紫外吸收較彊;HPLC-LIF法檢測到的組分更多集中在弱極性和非極性區域,一方麵因為衍生化能夠改變組分的極性,另一方麵因為弱極性和非極性組分更容易被衍生化,此結果也說明兩種方法對樣品的檢測選擇性存在明顯差異.通過改變熒光衍生化反應條件(溶液pH值、緩遲液介質)對複雜樣品進行選擇性標記,有利于實現對低豐度蛋白和多肽的選擇性檢測.
장서간종류조직단백급기매해산물경4-불-7-초기-2,1,3-분병양잡악이서(NBD-F)재50 mmol/L붕사완충용액(pH 8.5)중실온피광연생1h후,채용고효액상색보-격광유도형광검측법(HPLC-LIF)분석(λ(ex)=473nm,λ(em)=525 mn),병여고효액상색보-자외검측법(HPLC-UV)재검측파장214 nm소득결과진행대비.대단백질매해산물적분석결과표명,LIF검측기인기경고적검측령민도,가현저제고검측능력,다수색보봉교자외신호고10배이상,최종다검측도42개봉.진일보대서간종류조직단백제취액적검측결과진행대비,HPLC-UV법검측도적조분집중재강겁성구역,설명양품중겁성조분적자외흡수교강;HPLC-LIF법검측도적조분경다집중재약겁성화비겁성구역,일방면인위연생화능구개변조분적겁성,령일방면인위약겁성화비겁성조분경용역피연생화,차결과야설명량충방법대양품적검측선택성존재명현차이.통과개변형광연생화반응조건(용액pH치、완충액개질)대복잡양품진행선택성표기,유리우실현대저봉도단백화다태적선택성검측.
