大豆科学
大豆科學
대두과학
SOYBEAN SCIENCE
2012年
2期
198-202
,共5页
郑雅楠%王媛媛%陈井生%朱晓峰%陈立杰%段玉玺
鄭雅楠%王媛媛%陳井生%硃曉峰%陳立傑%段玉璽
정아남%왕원원%진정생%주효봉%진립걸%단옥새
大豆胞囊线虫%热激蛋白70%克隆%表达
大豆胞囊線蟲%熱激蛋白70%剋隆%錶達
대두포낭선충%열격단백70%극륭%표체
采用RT-PCR技术结合基因组步移技术,从大豆胞囊线虫(Heterodera glycines)中克隆了热激蛋白70基因(Hsp70)的全长cDNA序列(Hg-Hsp-70),全长1953bp,GenBank登录号为FJ816100.1.碱基序列分析结果表明,该序列含有9个外显子与8个内含子,与其它线虫具有较高的同源性.氨基酸序列分析表明,该基因编码650个氨基酸,相对分子量为70.7 kD,具有2个Hsp70基因家族的签名序列,与其它线虫的该基因氨基酸序列具有很高的同源性.构建了原核表达载体Hsp70pEASY-El,采用IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE电泳结果表明,当IPTG终浓度为0.2～1.2 mmol·L-1时均能显著诱导表达；以终浓度0.8 mmol·L-1的IPTG诱导5h蛋白表达量达到最大值.
採用RT-PCR技術結閤基因組步移技術,從大豆胞囊線蟲(Heterodera glycines)中剋隆瞭熱激蛋白70基因(Hsp70)的全長cDNA序列(Hg-Hsp-70),全長1953bp,GenBank登錄號為FJ816100.1.堿基序列分析結果錶明,該序列含有9箇外顯子與8箇內含子,與其它線蟲具有較高的同源性.氨基痠序列分析錶明,該基因編碼650箇氨基痠,相對分子量為70.7 kD,具有2箇Hsp70基因傢族的籤名序列,與其它線蟲的該基因氨基痠序列具有很高的同源性.構建瞭原覈錶達載體Hsp70pEASY-El,採用IPTG誘導蛋白錶達,SDS-PAGE電泳結果錶明,噹IPTG終濃度為0.2～1.2 mmol·L-1時均能顯著誘導錶達；以終濃度0.8 mmol·L-1的IPTG誘導5h蛋白錶達量達到最大值.
채용RT-PCR기술결합기인조보이기술,종대두포낭선충(Heterodera glycines)중극륭료열격단백70기인(Hsp70)적전장cDNA서렬(Hg-Hsp-70),전장1953bp,GenBank등록호위FJ816100.1.감기서렬분석결과표명,해서렬함유9개외현자여8개내함자,여기타선충구유교고적동원성.안기산서렬분석표명,해기인편마650개안기산,상대분자량위70.7 kD,구유2개Hsp70기인가족적첨명서렬,여기타선충적해기인안기산서렬구유흔고적동원성.구건료원핵표체재체Hsp70pEASY-El,채용IPTG유도단백표체,SDS-PAGE전영결과표명,당IPTG종농도위0.2～1.2 mmol·L-1시균능현저유도표체；이종농도0.8 mmol·L-1적IPTG유도5h단백표체량체도최대치.
