中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2012年
8期
1488-1493
,共6页
谭美华%陈建苏%招志毅%丁勇%钟敬祥%戴应%李善义%杨皓庄
譚美華%陳建囌%招誌毅%丁勇%鐘敬祥%戴應%李善義%楊皓莊
담미화%진건소%초지의%정용%종경상%대응%리선의%양호장
诱导多能干细胞%角膜内皮细胞%混合培养%显微镜检查,原子力%水通道蛋白1
誘導多能榦細胞%角膜內皮細胞%混閤培養%顯微鏡檢查,原子力%水通道蛋白1
유도다능간세포%각막내피세포%혼합배양%현미경검사,원자력%수통도단백1
目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据.方法:分离培养兔CECs并传代,同时使用无饲养层细胞法培养扩增人脐带源iPSCs,Western blotting对其进行鉴定;用量子点对iPSCs进行标记示踪,以不同密度比例建立iPSCs与CECs的共培养模式,用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)结合倒置显微镜观察共培养前后iPSCs的形态学变化,免疫荧光法检测iPSCs分化前后CD34、CD133、CD31和水通道蛋白1(AQP1)蛋白表达的变化.结果:培养扩增的兔CECs 形态为六边形,呈典型的铺路石样外观;iPSCs呈克隆样生长,Western blotting检测Oct4、Nanog和Sox2多能性标志蛋白均呈阳性;10 nmol/L量子点标记的iPSCs以1/4悬液与融合60%的兔CECs共培养为最佳模式;AFM结合倒置显微镜观察到共培养后iPSCs体积增大,胞浆增多,核浆比减小,细胞膜表面可见颗粒状突起物,膜表面粗糙度增加;免疫荧光法检测分化前iPSCs的 CD34、CD133、CD31和AQP1表达均呈阴性,共培养2周后iPSCs的CD34、CD133和CD31表达阴性,AQP1表达阳性.结论:与兔CECs混合共培养后人iPSCs不仅从形态学上向内皮样细胞方向转化,同时表达角膜内皮细胞标志蛋白AQP1.
目的:觀察人誘導多能榦細胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)與兔角膜內皮細胞(corneal endothelial cells,CECs)共培養前後的形態學變化,檢測iPSCs嚮CECs分化前後部分標誌蛋白錶達的變化,為研究iPSCs嚮CECs的分化提供實驗依據.方法:分離培養兔CECs併傳代,同時使用無飼養層細胞法培養擴增人臍帶源iPSCs,Western blotting對其進行鑒定;用量子點對iPSCs進行標記示蹤,以不同密度比例建立iPSCs與CECs的共培養模式,用原子力顯微鏡(atomic force microscopy,AFM)結閤倒置顯微鏡觀察共培養前後iPSCs的形態學變化,免疫熒光法檢測iPSCs分化前後CD34、CD133、CD31和水通道蛋白1(AQP1)蛋白錶達的變化.結果:培養擴增的兔CECs 形態為六邊形,呈典型的鋪路石樣外觀;iPSCs呈剋隆樣生長,Western blotting檢測Oct4、Nanog和Sox2多能性標誌蛋白均呈暘性;10 nmol/L量子點標記的iPSCs以1/4懸液與融閤60%的兔CECs共培養為最佳模式;AFM結閤倒置顯微鏡觀察到共培養後iPSCs體積增大,胞漿增多,覈漿比減小,細胞膜錶麵可見顆粒狀突起物,膜錶麵粗糙度增加;免疫熒光法檢測分化前iPSCs的 CD34、CD133、CD31和AQP1錶達均呈陰性,共培養2週後iPSCs的CD34、CD133和CD31錶達陰性,AQP1錶達暘性.結論:與兔CECs混閤共培養後人iPSCs不僅從形態學上嚮內皮樣細胞方嚮轉化,同時錶達角膜內皮細胞標誌蛋白AQP1.
목적:관찰인유도다능간세포(induced pluripotent stem cells,iPSCs)여토각막내피세포(corneal endothelial cells,CECs)공배양전후적형태학변화,검측iPSCs향CECs분화전후부분표지단백표체적변화,위연구iPSCs향CECs적분화제공실험의거.방법:분리배양토CECs병전대,동시사용무사양층세포법배양확증인제대원iPSCs,Western blotting대기진행감정;용양자점대iPSCs진행표기시종,이불동밀도비례건립iPSCs여CECs적공배양모식,용원자력현미경(atomic force microscopy,AFM)결합도치현미경관찰공배양전후iPSCs적형태학변화,면역형광법검측iPSCs분화전후CD34、CD133、CD31화수통도단백1(AQP1)단백표체적변화.결과:배양확증적토CECs 형태위륙변형,정전형적포로석양외관;iPSCs정극륭양생장,Western blotting검측Oct4、Nanog화Sox2다능성표지단백균정양성;10 nmol/L양자점표기적iPSCs이1/4현액여융합60%적토CECs공배양위최가모식;AFM결합도치현미경관찰도공배양후iPSCs체적증대,포장증다,핵장비감소,세포막표면가견과립상돌기물,막표면조조도증가;면역형광법검측분화전iPSCs적 CD34、CD133、CD31화AQP1표체균정음성,공배양2주후iPSCs적CD34、CD133화CD31표체음성,AQP1표체양성.결론:여토CECs혼합공배양후인iPSCs불부종형태학상향내피양세포방향전화,동시표체각막내피세포표지단백AQP1.
