生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2012年
4期
18-21
,共4页
孙磊%张国军%闫爱玲%徐海英
孫磊%張國軍%閆愛玲%徐海英
손뢰%장국군%염애령%서해영
甘露糖异构酶基因%标记基因%植物表达载体%克隆
甘露糖異構酶基因%標記基因%植物錶達載體%剋隆
감로당이구매기인%표기기인%식물표체재체%극륭
目的:构建了以manA基因为选择标记的植物表达载体.方法:从大肠杆菌DH5α中克隆出manA基因,连接到质粒pCAMBIA1301的Xho Ⅰ位点,替换hpt基因,通过酶切和PCR检测了插入片段的正确性,使用Xba Ⅰ和Hinid Ⅲ酶切Gateway载体(pGWCBF)获得含有P35S - T35S - attR1 - attR2 - CmR - ccdB的结构域,将其插入到表达载体pCAMBIA1301的相应位点中,获得中间表达载体pCAMBIA1301 -manA - GW,使用Gateway载体的BP反应与LR反应,将转录因子CBF基因片段整合到载体中.结果:酶切结果表明以甘露糖异构酶基因(manA)为选择标记的植物表达载体pCAMBIA1301 -manA - CBF已经构建完成.结论:将构建好的载体用液氮冻融法转化到农杆菌中,可以用于葡萄的遗传转化研究,为将来获得安全的转基因抗寒植株奠定基础.
目的:構建瞭以manA基因為選擇標記的植物錶達載體.方法:從大腸桿菌DH5α中剋隆齣manA基因,連接到質粒pCAMBIA1301的Xho Ⅰ位點,替換hpt基因,通過酶切和PCR檢測瞭插入片段的正確性,使用Xba Ⅰ和Hinid Ⅲ酶切Gateway載體(pGWCBF)穫得含有P35S - T35S - attR1 - attR2 - CmR - ccdB的結構域,將其插入到錶達載體pCAMBIA1301的相應位點中,穫得中間錶達載體pCAMBIA1301 -manA - GW,使用Gateway載體的BP反應與LR反應,將轉錄因子CBF基因片段整閤到載體中.結果:酶切結果錶明以甘露糖異構酶基因(manA)為選擇標記的植物錶達載體pCAMBIA1301 -manA - CBF已經構建完成.結論:將構建好的載體用液氮凍融法轉化到農桿菌中,可以用于葡萄的遺傳轉化研究,為將來穫得安全的轉基因抗寒植株奠定基礎.
목적:구건료이manA기인위선택표기적식물표체재체.방법:종대장간균DH5α중극륭출manA기인,련접도질립pCAMBIA1301적Xho Ⅰ위점,체환hpt기인,통과매절화PCR검측료삽입편단적정학성,사용Xba Ⅰ화Hinid Ⅲ매절Gateway재체(pGWCBF)획득함유P35S - T35S - attR1 - attR2 - CmR - ccdB적결구역,장기삽입도표체재체pCAMBIA1301적상응위점중,획득중간표체재체pCAMBIA1301 -manA - GW,사용Gateway재체적BP반응여LR반응,장전록인자CBF기인편단정합도재체중.결과:매절결과표명이감로당이구매기인(manA)위선택표기적식물표체재체pCAMBIA1301 -manA - CBF이경구건완성.결론:장구건호적재체용액담동융법전화도농간균중,가이용우포도적유전전화연구,위장래획득안전적전기인항한식주전정기출.
