广州医学院学报
廣州醫學院學報
엄주의학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGZHOU MEDICAL COLLEGE
2005年
1期
19-22
,共4页
田朝伟%杨晓仪%贾宗剑%吴文言%黄少华%陈敏生
田朝偉%楊曉儀%賈宗劍%吳文言%黃少華%陳敏生
전조위%양효의%가종검%오문언%황소화%진민생
噬菌体展示%抗体组合文库%D二聚体%PCR
噬菌體展示%抗體組閤文庫%D二聚體%PCR
서균체전시%항체조합문고%D이취체%PCR
目的:从人源性噬菌体抗体库中筛选抗人D二聚体单克隆抗体并进行可溶性表达.方法:以人D二聚体标准品为抗原对所构建的噬菌体抗体库进行两轮"吸附-洗脱-扩增"筛选,从中筛选出抗人D二聚体的噬菌体Fab抗体,并在大肠杆菌细胞中进行可溶性表达.结果:经4次电转化构建了库容为2.8×108cfu的抗体库,滴度为4.1×1014PFU/mL,Fab基因重组率为46%.经过淘筛后携带抗人D二聚体抗体的特异性噬菌体得到了明显的富集.用试剂盒以ELISA法检测对人D二聚体的结合活性,得到抗人D二聚体单克隆抗体.筛选出的阳性克隆成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达筛选出的阳性克隆在大肠杆菌细胞中可溶性表达.结论:人D二聚体标准品对抗体库的淘筛,富集了表面呈现抗人D二聚体的单克隆抗体的噬菌体,成功构建了人源性抗D二聚体噬菌体抗体,并成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达.
目的:從人源性噬菌體抗體庫中篩選抗人D二聚體單剋隆抗體併進行可溶性錶達.方法:以人D二聚體標準品為抗原對所構建的噬菌體抗體庫進行兩輪"吸附-洗脫-擴增"篩選,從中篩選齣抗人D二聚體的噬菌體Fab抗體,併在大腸桿菌細胞中進行可溶性錶達.結果:經4次電轉化構建瞭庫容為2.8×108cfu的抗體庫,滴度為4.1×1014PFU/mL,Fab基因重組率為46%.經過淘篩後攜帶抗人D二聚體抗體的特異性噬菌體得到瞭明顯的富集.用試劑盒以ELISA法檢測對人D二聚體的結閤活性,得到抗人D二聚體單剋隆抗體.篩選齣的暘性剋隆成功在大腸桿菌細胞中可溶性錶達篩選齣的暘性剋隆在大腸桿菌細胞中可溶性錶達.結論:人D二聚體標準品對抗體庫的淘篩,富集瞭錶麵呈現抗人D二聚體的單剋隆抗體的噬菌體,成功構建瞭人源性抗D二聚體噬菌體抗體,併成功在大腸桿菌細胞中可溶性錶達.
목적:종인원성서균체항체고중사선항인D이취체단극륭항체병진행가용성표체.방법:이인D이취체표준품위항원대소구건적서균체항체고진행량륜"흡부-세탈-확증"사선,종중사선출항인D이취체적서균체Fab항체,병재대장간균세포중진행가용성표체.결과:경4차전전화구건료고용위2.8×108cfu적항체고,적도위4.1×1014PFU/mL,Fab기인중조솔위46%.경과도사후휴대항인D이취체항체적특이성서균체득도료명현적부집.용시제합이ELISA법검측대인D이취체적결합활성,득도항인D이취체단극륭항체.사선출적양성극륭성공재대장간균세포중가용성표체사선출적양성극륭재대장간균세포중가용성표체.결론:인D이취체표준품대항체고적도사,부집료표면정현항인D이취체적단극륭항체적서균체,성공구건료인원성항D이취체서균체항체,병성공재대장간균세포중가용성표체.
