中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因的分离、克隆和鉴定
중국인장도산갑산초산간균갑선보매A전이매기인적분리、극륭화감정
Molecular Cloning, Identification and Expression of frc, the Formyl-CoA Transferase Gene of Oxalobacter Formigenes
  • 万方数据
    华中科技大学学报（医学版） 화중과기대학학보（의학판）
    ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
    2007年 3期 314-317 ,共4页

    孔德波%叶章群%陈志强%杨为民%姚林方%郭辉%刘冠琳%曾令启

    공덕파%협장군%진지강%양위민%요림방%곽휘%류관림%증령계

    高草酸尿%基因治疗%产甲酸草酸杆菌%甲酰辅酶A转移酶 高草痠尿%基因治療%產甲痠草痠桿菌%甲酰輔酶A轉移酶
    고초산뇨%기인치료%산갑산초산간균%갑선보매A전이매
    目的 克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达.方法 用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重组质粒.重组质粒转染人胚肾293细胞,检测frc基因在mRNA和蛋白水平上的表达.被转染细胞在含草酸培养液中培养,检测0～72 h培养液中草酸浓度的变化.结果 frc基因的真核表达载体构建成功.转染293细胞后24～72 h,可观察到明亮的绿色荧光,在mRNA和蛋白水平上可检测到frc基因在真核细胞中的表达.转染pEGFP-frc细胞12～72 h培养液中草酸浓度明显低于转染空载体的细胞(P＜0.05).结论 中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可分离出frc基因;frc基因可在真核细胞293细胞中表达并使293细胞获得代谢草酸的能力.
    목적 극륭산갑산초산간균갑선보매A전이매기인(frc),검측기재진핵세포중적표체.방법 용취합매련식반응기술종산갑산초산간균기인조DNA중확증frc기인편단병삽입진핵표체재체획취중조질립pEGFP-frc,통과한제성내절매매절전영화측서감정중조질립.중조질립전염인배신293세포,검측frc기인재mRNA화단백수평상적표체.피전염세포재함초산배양액중배양,검측0～72 h배양액중초산농도적변화.결과 frc기인적진핵표체재체구건성공.전염293세포후24～72 h,가관찰도명량적록색형광,재mRNA화단백수평상가검측도frc기인재진핵세포중적표체.전염pEGFP-frc세포12～72 h배양액중초산농도명현저우전염공재체적세포(P＜0.05).결론 중국인장도산갑산초산간균중가분리출frc기인;frc기인가재진핵세포293세포중표체병사293세포획득대사초산적능력.
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