实用口腔医学杂志
實用口腔醫學雜誌
실용구강의학잡지
JOURNAL OF PRACTICAL STOMATOLOGY
2008年
1期
13-16
,共4页
刘华联%江宏兵%邢树忠%刘来奎%王子露%郑阳玉
劉華聯%江宏兵%邢樹忠%劉來奎%王子露%鄭暘玉
류화련%강굉병%형수충%류래규%왕자로%정양옥
黏着斑激酶%舌癌细胞%RNA干扰
黏著斑激酶%舌癌細胞%RNA榦擾
점착반격매%설암세포%RNA간우
目的:构建靶向黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒表达载体,转染人舌癌细胞Tca8113后观察其对FAK表达的抑制作用.方法:根据siRNA的设计原则,在人FAK mRNA序列中,设计并合成2条特异性靶序列寡核苷酸及2条无关对照序列,经退火成互补双链,再克隆到pGC-silencerTM-U6/Neo真核表达载体中,构建重组体pSilencer-FAK并进行酶切鉴定;转染重组质粒至Tca8113细胞中,经G418抗性筛选,获得稳定转染细胞系;运用免疫细胞化学和Westem-blot鉴定FAK的沉默效应.结果:质粒酶切证实目的寡核苷酸片段已被克隆到pGC-SilencerTM-U6/Neo载体中;psi-lencer-FAK转染细胞后,FAK基因的表达受到明显抑制.结论:成功构建了针对人FAK的siRNA表达载体,通过转染Tca8113细胞可有效地抑制细胞中FAK的表达.
目的:構建靶嚮黏著斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因的小榦涉RNA(small interfering RNA,siRNA)質粒錶達載體,轉染人舌癌細胞Tca8113後觀察其對FAK錶達的抑製作用.方法:根據siRNA的設計原則,在人FAK mRNA序列中,設計併閤成2條特異性靶序列寡覈苷痠及2條無關對照序列,經退火成互補雙鏈,再剋隆到pGC-silencerTM-U6/Neo真覈錶達載體中,構建重組體pSilencer-FAK併進行酶切鑒定;轉染重組質粒至Tca8113細胞中,經G418抗性篩選,穫得穩定轉染細胞繫;運用免疫細胞化學和Westem-blot鑒定FAK的沉默效應.結果:質粒酶切證實目的寡覈苷痠片段已被剋隆到pGC-SilencerTM-U6/Neo載體中;psi-lencer-FAK轉染細胞後,FAK基因的錶達受到明顯抑製.結論:成功構建瞭針對人FAK的siRNA錶達載體,通過轉染Tca8113細胞可有效地抑製細胞中FAK的錶達.
목적:구건파향점착반격매(focal adhesion kinase,FAK)기인적소간섭RNA(small interfering RNA,siRNA)질립표체재체,전염인설암세포Tca8113후관찰기대FAK표체적억제작용.방법:근거siRNA적설계원칙,재인FAK mRNA서렬중,설계병합성2조특이성파서렬과핵감산급2조무관대조서렬,경퇴화성호보쌍련,재극륭도pGC-silencerTM-U6/Neo진핵표체재체중,구건중조체pSilencer-FAK병진행매절감정;전염중조질립지Tca8113세포중,경G418항성사선,획득은정전염세포계;운용면역세포화학화Westem-blot감정FAK적침묵효응.결과:질립매절증실목적과핵감산편단이피극륭도pGC-SilencerTM-U6/Neo재체중;psi-lencer-FAK전염세포후,FAK기인적표체수도명현억제.결론:성공구건료침대인FAK적siRNA표체재체,통과전염Tca8113세포가유효지억제세포중FAK적표체.
