医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2009年
1期
38-41
,共4页
李春炎%杨兵%李兴玉%俞亚东
李春炎%楊兵%李興玉%俞亞東
리춘염%양병%리흥옥%유아동
p53基因%K562%FCM%细胞凋亡
p53基因%K562%FCM%細胞凋亡
p53기인%K562%FCM%세포조망
目的 原核表达P53重组蛋白,检测P53蛋白对人类白血病细胞系K562增生的影响.方法 运用PCR技术鉴定了pET-p53重组质粒导人BL21菌株中p53基因的存在,并在IPTG的诱导下,大量产生外源基因产物.通过Ni-NAT亲和层析柱纯化分离P53蛋白,SDS-PAGE确定该蛋白准确性.以不同浓度的P53重组蛋白诱导K562细胞后,用MTT比色法、集落形成法、流式细胞术(FCM)测定P53蛋白对靶细胞增生的影响.结果 成功地构建了含人野生型p53基因的原核表达载体,纯化了P53重组蛋白.活性测定结果表明,随着P53重组蛋白浓度的增加,K562细胞存活率显著降低,并发现该蛋白能促进肿瘤细胞凋亡,且呈现明显的剂量依赖性,经相关分析,细胞抑制率与P53蛋白浓度呈正相关(r=0.8981),其半数抑制浓度(IC50)为6.74μg/ml.结论 P53重组蛋白具有促进K562细胞凋亡的作用.
目的 原覈錶達P53重組蛋白,檢測P53蛋白對人類白血病細胞繫K562增生的影響.方法 運用PCR技術鑒定瞭pET-p53重組質粒導人BL21菌株中p53基因的存在,併在IPTG的誘導下,大量產生外源基因產物.通過Ni-NAT親和層析柱純化分離P53蛋白,SDS-PAGE確定該蛋白準確性.以不同濃度的P53重組蛋白誘導K562細胞後,用MTT比色法、集落形成法、流式細胞術(FCM)測定P53蛋白對靶細胞增生的影響.結果 成功地構建瞭含人野生型p53基因的原覈錶達載體,純化瞭P53重組蛋白.活性測定結果錶明,隨著P53重組蛋白濃度的增加,K562細胞存活率顯著降低,併髮現該蛋白能促進腫瘤細胞凋亡,且呈現明顯的劑量依賴性,經相關分析,細胞抑製率與P53蛋白濃度呈正相關(r=0.8981),其半數抑製濃度(IC50)為6.74μg/ml.結論 P53重組蛋白具有促進K562細胞凋亡的作用.
목적 원핵표체P53중조단백,검측P53단백대인류백혈병세포계K562증생적영향.방법 운용PCR기술감정료pET-p53중조질립도인BL21균주중p53기인적존재,병재IPTG적유도하,대양산생외원기인산물.통과Ni-NAT친화층석주순화분리P53단백,SDS-PAGE학정해단백준학성.이불동농도적P53중조단백유도K562세포후,용MTT비색법、집락형성법、류식세포술(FCM)측정P53단백대파세포증생적영향.결과 성공지구건료함인야생형p53기인적원핵표체재체,순화료P53중조단백.활성측정결과표명,수착P53중조단백농도적증가,K562세포존활솔현저강저,병발현해단백능촉진종류세포조망,차정현명현적제량의뢰성,경상관분석,세포억제솔여P53단백농도정정상관(r=0.8981),기반수억제농도(IC50)위6.74μg/ml.결론 P53중조단백구유촉진K562세포조망적작용.
