中国临床神经外科杂志
中國臨床神經外科雜誌
중국림상신경외과잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL NEUROSURGERY
2011年
9期
541-544
,共4页
秦怀洲%张治国%王举磊%吴琳%李立宏%高国栋
秦懷洲%張治國%王舉磊%吳琳%李立宏%高國棟
진부주%장치국%왕거뢰%오림%리립굉%고국동
DNA甲基化酶%真核表达载体%神经母细胞瘤
DNA甲基化酶%真覈錶達載體%神經母細胞瘤
DNA갑기화매%진핵표체재체%신경모세포류
目的 在pcDNA3.1真核表达载体中构建表达融合myc/his标签的甲基化酶表达载体pcDNA3.1-3a,并在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中进行验证,以期获得可表达甲基化酶催化结构域的融合基因.方法 以甲基化酶的pcDNA4.0-GBD-3a-myc/his质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得融合有myc/his标签序列的目的 区段-甲基化酶催化结构域3a,将其克隆入真核表达载体peDNA3.1;以EcoR I、EcoR V双酶切和PCR方法对构建的表达载体进行鉴定,并通过测序证明载体构建正确,同时检测甲基化酶3a在SK-N-SH细胞中的表达.结果 通过PCR方法获得了含有甲基化酶催化结构域的真核表达载体pcDNA3.1-3a,并通过免疫印记方法验证了在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞样品中用抗his标签抗体可以特异性识别目的 蛋白.结论 正确构建了甲基化酶表达载体pcDNA3.1-3a,其可在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中表达.
目的 在pcDNA3.1真覈錶達載體中構建錶達融閤myc/his標籤的甲基化酶錶達載體pcDNA3.1-3a,併在神經母細胞瘤細胞株SK-N-SH細胞中進行驗證,以期穫得可錶達甲基化酶催化結構域的融閤基因.方法 以甲基化酶的pcDNA4.0-GBD-3a-myc/his質粒為模闆,通過PCR的方法擴增穫得融閤有myc/his標籤序列的目的 區段-甲基化酶催化結構域3a,將其剋隆入真覈錶達載體peDNA3.1;以EcoR I、EcoR V雙酶切和PCR方法對構建的錶達載體進行鑒定,併通過測序證明載體構建正確,同時檢測甲基化酶3a在SK-N-SH細胞中的錶達.結果 通過PCR方法穫得瞭含有甲基化酶催化結構域的真覈錶達載體pcDNA3.1-3a,併通過免疫印記方法驗證瞭在神經母細胞瘤細胞株SK-N-SH細胞樣品中用抗his標籤抗體可以特異性識彆目的 蛋白.結論 正確構建瞭甲基化酶錶達載體pcDNA3.1-3a,其可在神經母細胞瘤細胞株SK-N-SH細胞中錶達.
목적 재pcDNA3.1진핵표체재체중구건표체융합myc/his표첨적갑기화매표체재체pcDNA3.1-3a,병재신경모세포류세포주SK-N-SH세포중진행험증,이기획득가표체갑기화매최화결구역적융합기인.방법 이갑기화매적pcDNA4.0-GBD-3a-myc/his질립위모판,통과PCR적방법확증획득융합유myc/his표첨서렬적목적 구단-갑기화매최화결구역3a,장기극륭입진핵표체재체peDNA3.1;이EcoR I、EcoR V쌍매절화PCR방법대구건적표체재체진행감정,병통과측서증명재체구건정학,동시검측갑기화매3a재SK-N-SH세포중적표체.결과 통과PCR방법획득료함유갑기화매최화결구역적진핵표체재체pcDNA3.1-3a,병통과면역인기방법험증료재신경모세포류세포주SK-N-SH세포양품중용항his표첨항체가이특이성식별목적 단백.결론 정학구건료갑기화매표체재체pcDNA3.1-3a,기가재신경모세포류세포주SK-N-SH세포중표체.
