CAJ | 학술논문

通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得编码病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)核蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,并在E.coli BL21(DE3)中得到表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定.结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为1 221 bp核蛋白基因片段,诱导表达重组质粒pET28a-N,经SDS-PAGE检测,IPTG终浓度为1 mmol/L时,诱导5h蛋白表达量最高,获得的目的蛋白大小与N蛋白的预测分子质量一致,约为48 ku.诱导后的菌液进行超声波破碎后,将沉淀和上清分别用于SDS-PAGE电泳,结果表明目的蛋白主要以包涵体的形式存在.表达蛋白经过复性、纯化,得到了较高纯度的可溶性蛋白.经Western-blot检测表明,该表达产物能被羊抗VHSV阳性血清特异性识别.
통과역전록취합매련식반응(RT-PCR)획득편마병독성출혈성패혈증병독(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)핵단백기인,장기극륭지원핵표체재체pET28a,병재E.coli BL21(DE3)중득도표체,용SDS-PAGE여Western-blot대표체산물진행감정.결과표명,통과RT-PCR확증획득장도위1 221 bp핵단백기인편단,유도표체중조질립pET28a-N,경SDS-PAGE검측,IPTG종농도위1 mmol/L시,유도5h단백표체량최고,획득적목적단백대소여N단백적예측분자질량일치,약위48 ku.유도후적균액진행초성파파쇄후,장침정화상청분별용우SDS-PAGE전영,결과표명목적단백주요이포함체적형식존재.표체단백경과복성、순화,득도료교고순도적가용성단백.경Western-blot검측표명,해표체산물능피양항VHSV양성혈청특이성식별.