成都医学院学报
成都醫學院學報
성도의학원학보
JOURNAL OF CHENGDU MEDICAL COLLEGE
2012年
3期
393-395
,共3页
邓守恒%柯贤柱%石小燕%蔡召忠%杨敬宁%黄永章%陈萍
鄧守恆%柯賢柱%石小燕%蔡召忠%楊敬寧%黃永章%陳萍
산수항%가현주%석소연%채소충%양경저%황영장%진평
pET15b-VP3%靶向克隆%原核表达
pET15b-VP3%靶嚮剋隆%原覈錶達
pET15b-VP3%파향극륭%원핵표체
目的 探索利用PCR产物靶向克隆法构建能够表达凋亡素的pET15b-VP3原核表达载体.方法 以PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒为模板,PCR扩增VP3基因的366 bp片段,应用靶向克隆酶,将VP3基因插入到线性pET15b,得到重组表达载体pET15b-VP3,经过筛选,挑选出阳性克隆进行Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切,图谱分析和重组质粒核苷酸序列分析以鉴定所构建的原核表达载体.结果 PCR产物经过电泳鉴定可见366 bp特征性的VP3片段,重组质粒经双酶切电泳获得了一个大小为366 bp的VP3片段,重组质粒测序证实VP3 cDNA编码区成功地插入了pET15b,且其序列与GeneBank中VP3 cDNA序列完全一致.结论 靶向克隆法可快速,高效地构建pET15b-VP3原核表达载体,为进一步研究VP3药用价值奠定了基础.
目的 探索利用PCR產物靶嚮剋隆法構建能夠錶達凋亡素的pET15b-VP3原覈錶達載體.方法 以PGEX-6P-1/TAT-VP3質粒為模闆,PCR擴增VP3基因的366 bp片段,應用靶嚮剋隆酶,將VP3基因插入到線性pET15b,得到重組錶達載體pET15b-VP3,經過篩選,挑選齣暘性剋隆進行Xho Ⅰ和BamH Ⅰ雙酶切,圖譜分析和重組質粒覈苷痠序列分析以鑒定所構建的原覈錶達載體.結果 PCR產物經過電泳鑒定可見366 bp特徵性的VP3片段,重組質粒經雙酶切電泳穫得瞭一箇大小為366 bp的VP3片段,重組質粒測序證實VP3 cDNA編碼區成功地插入瞭pET15b,且其序列與GeneBank中VP3 cDNA序列完全一緻.結論 靶嚮剋隆法可快速,高效地構建pET15b-VP3原覈錶達載體,為進一步研究VP3藥用價值奠定瞭基礎.
목적 탐색이용PCR산물파향극륭법구건능구표체조망소적pET15b-VP3원핵표체재체.방법 이PGEX-6P-1/TAT-VP3질립위모판,PCR확증VP3기인적366 bp편단,응용파향극륭매,장VP3기인삽입도선성pET15b,득도중조표체재체pET15b-VP3,경과사선,도선출양성극륭진행Xho Ⅰ화BamH Ⅰ쌍매절,도보분석화중조질립핵감산서렬분석이감정소구건적원핵표체재체.결과 PCR산물경과전영감정가견366 bp특정성적VP3편단,중조질립경쌍매절전영획득료일개대소위366 bp적VP3편단,중조질립측서증실VP3 cDNA편마구성공지삽입료pET15b,차기서렬여GeneBank중VP3 cDNA서렬완전일치.결론 파향극륭법가쾌속,고효지구건pET15b-VP3원핵표체재체,위진일보연구VP3약용개치전정료기출.
