CAJ | 학술논문

目的：选用高效表达载体分别高效表达人源抗HBsAg抗体的Fd段和L链，经包涵体纯化和变性复性使Fd段和L链之间形成二硫键，最终制备有活性、高产量的人源抗HBsAg基因工程抗体Fab。方法：用PCR法从可溶性表达重组质粒抗HBsAg Fad Comb3扩增Fd段和L链后分别构建高效表达载体PQE32-Fd和PQE32-L，并分别导入大肠杆菌M15中进行表达，用SDS-PAGE筛选出高效表达克隆。结果：SDS-PAGE筛选的高效表达克隆M15-PQE32-Fd和M15-PQE32-L经IPTG诱导后以包涵体形式表达，其表达量很高。从高效表达克隆重新扩增Fd段和L链后进行测序鉴定发现所得的序列与已报道的抗HBsAg抗体Fab基因吻合率为97％。结论：虽然已有表达可溶性人源抗HBsAg基因工程抗体Fab的报道，但因其表达量低而不能实际应用。筛选出高效表达人源抗HBsAg抗体Fd段和L链的克隆，因为包涵体形式表达需经变性复性，虽然变性复性后其产量会受影响，但因表达量很高，所以还是有很高的实际应用价值。其包涵体变性复性条件仍需进一步探讨。
목적：선용고효표체재체분별고효표체인원항HBsAg항체적Fd단화L련，경포함체순화화변성복성사Fd단화L련지간형성이류건，최종제비유활성、고산량적인원항HBsAg기인공정항체Fab。방법：용PCR법종가용성표체중조질립항HBsAg Fad Comb3확증Fd단화L련후분별구건고효표체재체PQE32-Fd화PQE32-L，병분별도입대장간균M15중진행표체，용SDS-PAGE사선출고효표체극륭。결과：SDS-PAGE사선적고효표체극륭M15-PQE32-Fd화M15-PQE32-L경IPTG유도후이포함체형식표체，기표체량흔고。종고효표체극륭중신확증Fd단화L련후진행측서감정발현소득적서렬여이보도적항HBsAg항체Fab기인문합솔위97％。결론：수연이유표체가용성인원항HBsAg기인공정항체Fab적보도，단인기표체량저이불능실제응용。사선출고효표체인원항HBsAg항체Fd단화L련적극륭，인위포함체형식표체수경변성복성，수연변성복성후기산량회수영향，단인표체량흔고，소이환시유흔고적실제응용개치。기포함체변성복성조건잉수진일보탐토。