CAJ | 학술논문

严重急性呼吸综合征是SARS-CoV引起的一种重要新发传染病,其致病机制的研究对于防治该病十分必要.为了利用反向遗传学技术研究SARS-CoV的致病机制,将覆盖SARS-CoV BJ01株基因组全长的7个cDNA片段纯化后进行体外连接,构建基因组全长cDNA分子,以其为模板,使用 T7 RNA 聚合酶系统在体外进行转录, 获得病毒RNA.用电穿孔转染法将转录体RNA导入Vero E6细胞,可观察到典型的SARS-CoV致细胞病变作用.对收获的恢复病毒采用 RT-PCR方法进行鉴定,结果表明获得的恢复病毒与SARS-CoV BJ01株原病毒序列一致.以针对SARS-CoV的抗体对感染细胞作间接免疫荧光反应,证明获得了具有特异感染性的恢复病毒.同时用细胞病变法和空斑试验测定了恢复病毒及其亲本毒株的病毒滴度, 结果表明二者在致病性上没有明显差异,恢复病毒具有与原型株相似的生物学特性.SARS-CoV BJ01株基因组全长cDNA的成功构建及对恢复病毒生物学性质的研究将为进一步探索SARS-CoV致病的分子机制及研制新型疫苗奠定良好的基础.
엄중급성호흡종합정시SARS-CoV인기적일충중요신발전염병,기치병궤제적연구대우방치해병십분필요.위료이용반향유전학기술연구SARS-CoV적치병궤제,장복개SARS-CoV BJ01주기인조전장적7개cDNA편단순화후진행체외련접,구건기인조전장cDNA분자,이기위모판,사용 T7 RNA 취합매계통재체외진행전록, 획득병독RNA.용전천공전염법장전록체RNA도입Vero E6세포,가관찰도전형적SARS-CoV치세포병변작용.대수획적회복병독채용 RT-PCR방법진행감정,결과표명획득적회복병독여SARS-CoV BJ01주원병독서렬일치.이침대SARS-CoV적항체대감염세포작간접면역형광반응,증명획득료구유특이감염성적회복병독.동시용세포병변법화공반시험측정료회복병독급기친본독주적병독적도, 결과표명이자재치병성상몰유명현차이,회복병독구유여원형주상사적생물학특성.SARS-CoV BJ01주기인조전장cDNA적성공구건급대회복병독생물학성질적연구장위진일보탐색SARS-CoV치병적분자궤제급연제신형역묘전정량호적기출.