华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2007年
2期
141-144,152
,共5页
杨平%戴五星%刘朔捷%郭萍%马彦彬%唐成武%程继忠
楊平%戴五星%劉朔捷%郭萍%馬彥彬%唐成武%程繼忠
양평%대오성%류삭첩%곽평%마언빈%당성무%정계충
抗原,血吸虫%Sj26%疫苗,DNA%免疫性
抗原,血吸蟲%Sj26%疫苗,DNA%免疫性
항원,혈흡충%Sj26%역묘,DNA%면역성
目的 构建含日本血吸虫相对分子质量为26 000的抗原(Sj26GST)基因的膜锚定表达DNA疫苗,观察其免疫BALB/c小鼠后的免疫应答效应.方法 用RT-PCR法,以血吸虫成虫RNA为模板,扩增获得Sj26的全长基因.利用重组PCR技术,在Sj26基因的5′端加上编码IL-2的信号肽核苷酸序列,3′端加上编码胎盘碱性磷酸酶的膜锚定序列,然后将其克隆入pIRES载体中,构建一个膜锚定型真核表达质粒pIRES-Sj26.将重组质粒转染HeLa细胞,通过RT-PCR及间接免疫荧光技术检测目的基因的表达.用构建的pIRES-Sj26疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,以ELISA试剂盒检测小鼠血清中的总IgG抗体浓度,脾细胞培养法检测脾淋巴细胞培养上清的干扰素γ(INF-γ)含量,淋巴细胞刺激指数(SI)反映淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测脾细胞CD4/CD8亚群.结果 经过酶切鉴定、PCR及测序证实重组质粒pIRES-Sj26构建成功,经转染HeLa细胞及免疫荧光检测证明质粒pIRES-Sj26能在体外进行表达.免疫小鼠后检测结果表明pIRES-Sj26组的血清总IgG抗体浓度、INF-γ的含量明显高于空白对照组和空载体组(均P＜0.01);其脾SI高于空白对照组和空载体组(P＜0.05);CD8+细胞百分比高于空白对照组和空载体组 (均P＜0.05), CD4+细胞百分比没有显著变化(P＞0.05).结论 成功构建日本血吸虫膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26, 表达的Sj26蛋白大部分锚定在细胞膜上.pIRES-Sj26疫苗能增强BALB/c 小鼠的免疫应答反应.
目的 構建含日本血吸蟲相對分子質量為26 000的抗原(Sj26GST)基因的膜錨定錶達DNA疫苗,觀察其免疫BALB/c小鼠後的免疫應答效應.方法 用RT-PCR法,以血吸蟲成蟲RNA為模闆,擴增穫得Sj26的全長基因.利用重組PCR技術,在Sj26基因的5′耑加上編碼IL-2的信號肽覈苷痠序列,3′耑加上編碼胎盤堿性燐痠酶的膜錨定序列,然後將其剋隆入pIRES載體中,構建一箇膜錨定型真覈錶達質粒pIRES-Sj26.將重組質粒轉染HeLa細胞,通過RT-PCR及間接免疫熒光技術檢測目的基因的錶達.用構建的pIRES-Sj26疫苗肌肉註射免疫BALB/c小鼠後,以ELISA試劑盒檢測小鼠血清中的總IgG抗體濃度,脾細胞培養法檢測脾淋巴細胞培養上清的榦擾素γ(INF-γ)含量,淋巴細胞刺激指數(SI)反映淋巴細胞增殖能力,流式細胞術檢測脾細胞CD4/CD8亞群.結果 經過酶切鑒定、PCR及測序證實重組質粒pIRES-Sj26構建成功,經轉染HeLa細胞及免疫熒光檢測證明質粒pIRES-Sj26能在體外進行錶達.免疫小鼠後檢測結果錶明pIRES-Sj26組的血清總IgG抗體濃度、INF-γ的含量明顯高于空白對照組和空載體組(均P＜0.01);其脾SI高于空白對照組和空載體組(P＜0.05);CD8+細胞百分比高于空白對照組和空載體組 (均P＜0.05), CD4+細胞百分比沒有顯著變化(P＞0.05).結論 成功構建日本血吸蟲膜錨定錶達DNA疫苗pIRES-Sj26, 錶達的Sj26蛋白大部分錨定在細胞膜上.pIRES-Sj26疫苗能增彊BALB/c 小鼠的免疫應答反應.
목적 구건함일본혈흡충상대분자질량위26 000적항원(Sj26GST)기인적막묘정표체DNA역묘,관찰기면역BALB/c소서후적면역응답효응.방법 용RT-PCR법,이혈흡충성충RNA위모판,확증획득Sj26적전장기인.이용중조PCR기술,재Sj26기인적5′단가상편마IL-2적신호태핵감산서렬,3′단가상편마태반감성린산매적막묘정서렬,연후장기극륭입pIRES재체중,구건일개막묘정형진핵표체질립pIRES-Sj26.장중조질립전염HeLa세포,통과RT-PCR급간접면역형광기술검측목적기인적표체.용구건적pIRES-Sj26역묘기육주사면역BALB/c소서후,이ELISA시제합검측소서혈청중적총IgG항체농도,비세포배양법검측비림파세포배양상청적간우소γ(INF-γ)함량,림파세포자격지수(SI)반영림파세포증식능력,류식세포술검측비세포CD4/CD8아군.결과 경과매절감정、PCR급측서증실중조질립pIRES-Sj26구건성공,경전염HeLa세포급면역형광검측증명질립pIRES-Sj26능재체외진행표체.면역소서후검측결과표명pIRES-Sj26조적혈청총IgG항체농도、INF-γ적함량명현고우공백대조조화공재체조(균P＜0.01);기비SI고우공백대조조화공재체조(P＜0.05);CD8+세포백분비고우공백대조조화공재체조 (균P＜0.05), CD4+세포백분비몰유현저변화(P＞0.05).결론 성공구건일본혈흡충막묘정표체DNA역묘pIRES-Sj26, 표체적Sj26단백대부분묘정재세포막상.pIRES-Sj26역묘능증강BALB/c 소서적면역응답반응.
