中国国境卫生检疫杂志
中國國境衛生檢疫雜誌
중국국경위생검역잡지
CHINESE JOURNAL OF FRONTIER HEALTH AND QUARANTINE
2008年
4期
281-284
,共4页
田绿波%左浩江%陈肖潇%周倩%樊学军%吴志云%裴晓方
田綠波%左浩江%陳肖瀟%週倩%樊學軍%吳誌雲%裴曉方
전록파%좌호강%진초소%주천%번학군%오지운%배효방
杆菌%蜡样芽胞%TaqManTM探针%重组质粒%实时荧光定量PCR
桿菌%蠟樣芽胞%TaqManTM探針%重組質粒%實時熒光定量PCR
간균%사양아포%TaqManTM탐침%중조질립%실시형광정량PCR
[目的]构建蜡样芽胞杆菌16s-23sITS重组质粒,为实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌提供质粒标准.[方法]选择蜡样芽胞杆菌16s一23sITS特异基因作为目的靶序列,设计、合成引物和探针,采用普通PCR扩增特异靶序列,克隆到pGM-T载体后,转化感受态大肠埃希菌DH5α,经蓝白斑筛选,再分别用EcoRI酶切,普通PCR及测序3种方法证实目的片段已成功重组.建立荧光定量PCR检测蜡样芽胞杆菌的标准曲线.[结果]成功构建目的重组质粒,并以此为标准制作荧光定量PCR标准曲线.重组质粒标准具有较大的线性范围(102copies/μl～108%opies/μl)和灵敏度.[结论]该方法构建的16s-23sITS基因重组质粒能满足实时荧光定量测定对参考标准的要求,为后续实时荧光PCR快速检测蜡样芽胞杆菌的推广应用提供了条件.
[目的]構建蠟樣芽胞桿菌16s-23sITS重組質粒,為實時熒光PCR檢測蠟樣芽胞桿菌提供質粒標準.[方法]選擇蠟樣芽胞桿菌16s一23sITS特異基因作為目的靶序列,設計、閤成引物和探針,採用普通PCR擴增特異靶序列,剋隆到pGM-T載體後,轉化感受態大腸埃希菌DH5α,經藍白斑篩選,再分彆用EcoRI酶切,普通PCR及測序3種方法證實目的片段已成功重組.建立熒光定量PCR檢測蠟樣芽胞桿菌的標準麯線.[結果]成功構建目的重組質粒,併以此為標準製作熒光定量PCR標準麯線.重組質粒標準具有較大的線性範圍(102copies/μl～108%opies/μl)和靈敏度.[結論]該方法構建的16s-23sITS基因重組質粒能滿足實時熒光定量測定對參攷標準的要求,為後續實時熒光PCR快速檢測蠟樣芽胞桿菌的推廣應用提供瞭條件.
[목적]구건사양아포간균16s-23sITS중조질립,위실시형광PCR검측사양아포간균제공질립표준.[방법]선택사양아포간균16s일23sITS특이기인작위목적파서렬,설계、합성인물화탐침,채용보통PCR확증특이파서렬,극륭도pGM-T재체후,전화감수태대장애희균DH5α,경람백반사선,재분별용EcoRI매절,보통PCR급측서3충방법증실목적편단이성공중조.건립형광정량PCR검측사양아포간균적표준곡선.[결과]성공구건목적중조질립,병이차위표준제작형광정량PCR표준곡선.중조질립표준구유교대적선성범위(102copies/μl～108%opies/μl)화령민도.[결론]해방법구건적16s-23sITS기인중조질립능만족실시형광정량측정대삼고표준적요구,위후속실시형광PCR쾌속검측사양아포간균적추엄응용제공료조건.
