CAJ | 학술논문

采用RT-PCR方法扩增、克隆和鉴定了泥蚶(Tegillarca granosa)的金属硫蛋白(Metallothionein,MT)基因(TgMT)的开放阅读框(ORF).基于金属硫蛋白氨基酸序列构建的系统进化树表明,泥蚶和魁蚶(Scapharca broughtonii)的亲缘关系最近.利用ORF序列,构建原核重组表达质粒.重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序验证后转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3),经IPTG诱导,表达重组蛋白,重组蛋白的分子量约为28.3 kD.可溶性分析表明重组蛋白主要以可溶性形式存在.用His-tag柱亲和纯化重组蛋白,并利用重组蛋白制备了兔抗血清.Real-time PCR和Western blot实验表明,金属硫蛋白在泥蚶的各个组织中都有表达,并且在消化腺中的表达量最高.采用激光共聚焦显微镜,对泥蚶的消化腺进行免疫组化定位分析,发现泥蚶的MT主要存在于消化腺腺管上皮细胞的胞质中.泥蚶MT的克隆和表达研究为进一步研究该蛋白在环境监测中的作用、探讨细胞解毒的分子生物学机制奠定了基础.
채용RT-PCR방법확증、극륭화감정료니감(Tegillarca granosa)적금속류단백(Metallothionein,MT)기인(TgMT)적개방열독광(ORF).기우금속류단백안기산서렬구건적계통진화수표명,니감화괴감(Scapharca broughtonii)적친연관계최근.이용ORF서렬,구건원핵중조표체질립.중조질립경PCR、매절감정급측서험증후전화대장간균(Escherichia coli) BL21(DE3),경IPTG유도,표체중조단백,중조단백적분자량약위28.3 kD.가용성분석표명중조단백주요이가용성형식존재.용His-tag주친화순화중조단백,병이용중조단백제비료토항혈청.Real-time PCR화Western blot실험표명,금속류단백재니감적각개조직중도유표체,병차재소화선중적표체량최고.채용격광공취초현미경,대니감적소화선진행면역조화정위분석,발현니감적MT주요존재우소화선선관상피세포적포질중.니감MT적극륭화표체연구위진일보연구해단백재배경감측중적작용、탐토세포해독적분자생물학궤제전정료기출.