动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2012年
7期
32-39
,共8页
姚俊%杨永军%彭海生%陈官国%段国军%鲁富有%李华春
姚俊%楊永軍%彭海生%陳官國%段國軍%魯富有%李華春
요준%양영군%팽해생%진관국%단국군%로부유%리화춘
山羊痘病毒%SYBR GreenⅠ%实时定量PCR
山羊痘病毒%SYBR GreenⅠ%實時定量PCR
산양두병독%SYBR GreenⅠ%실시정량PCR
为了建立一种灵敏、特异、快速的山羊痘病毒实时定量检测方法,根据山羊痘病毒(AY077835)gp006基因序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计合成一对PCR引物.将被检测的目的DNA片段克隆PEASY-T1质粒,制备重组质粒标准品,以期建立以质粒拷贝数为单位的标准曲线.通过反应条件的优化及引物浓度的筛选,建立了山羊痘病毒SYBR Green Ⅰ实时定量PCR(real-time PCR)检测方法,最佳引物浓度为400 nmol/L.组内重复试验和组间重复试验变异系数均低于2％,最低检测限为1×101 copies/μL,上机检测时间在1h以内.用该方法对2011年流行于云南华坪、景谷及2003年流行于云南宣威、寻甸和昆明的山羊痘临床组织样品进行定量检测,结果送检组织样品抽提DNA中病毒含量分别为1.03×105、5.30×103、1.51×104、4.74×103、7.20×104 copies/μL.结果表明,所建立的real-time PCR具有灵敏、特异、快速的特点,适合于山羊痘临床组织样品的定量检测.
為瞭建立一種靈敏、特異、快速的山羊痘病毒實時定量檢測方法,根據山羊痘病毒(AY077835)gp006基因序列,應用Beacon Designer 7.7軟件設計閤成一對PCR引物.將被檢測的目的DNA片段剋隆PEASY-T1質粒,製備重組質粒標準品,以期建立以質粒拷貝數為單位的標準麯線.通過反應條件的優化及引物濃度的篩選,建立瞭山羊痘病毒SYBR Green Ⅰ實時定量PCR(real-time PCR)檢測方法,最佳引物濃度為400 nmol/L.組內重複試驗和組間重複試驗變異繫數均低于2％,最低檢測限為1×101 copies/μL,上機檢測時間在1h以內.用該方法對2011年流行于雲南華坪、景穀及2003年流行于雲南宣威、尋甸和昆明的山羊痘臨床組織樣品進行定量檢測,結果送檢組織樣品抽提DNA中病毒含量分彆為1.03×105、5.30×103、1.51×104、4.74×103、7.20×104 copies/μL.結果錶明,所建立的real-time PCR具有靈敏、特異、快速的特點,適閤于山羊痘臨床組織樣品的定量檢測.
위료건립일충령민、특이、쾌속적산양두병독실시정량검측방법,근거산양두병독(AY077835)gp006기인서렬,응용Beacon Designer 7.7연건설계합성일대PCR인물.장피검측적목적DNA편단극륭PEASY-T1질립,제비중조질립표준품,이기건립이질립고패수위단위적표준곡선.통과반응조건적우화급인물농도적사선,건립료산양두병독SYBR Green Ⅰ실시정량PCR(real-time PCR)검측방법,최가인물농도위400 nmol/L.조내중복시험화조간중복시험변이계수균저우2％,최저검측한위1×101 copies/μL,상궤검측시간재1h이내.용해방법대2011년류행우운남화평、경곡급2003년류행우운남선위、심전화곤명적산양두림상조직양품진행정량검측,결과송검조직양품추제DNA중병독함량분별위1.03×105、5.30×103、1.51×104、4.74×103、7.20×104 copies/μL.결과표명,소건립적real-time PCR구유령민、특이、쾌속적특점,괄합우산양두림상조직양품적정량검측.
