微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2004年
5期
672-675
,共4页
刘红%董杰%刘墨青%金奇
劉紅%董傑%劉墨青%金奇
류홍%동걸%류묵청%금기
志贺氏菌%胞内细菌%RNA提取%冷酸酚法
誌賀氏菌%胞內細菌%RNA提取%冷痠酚法
지하씨균%포내세균%RNA제취%랭산분법
病原菌全基因组表达谱研究是阐明其致病机理的必要的基础,已经成为当前生命科学领域的热点和重点;然而由于难于从感染的组织中快速固定并分离细菌RNA,从而极大的制约了该研究的进展.介绍一种从感染的细胞中分离细菌RNA的方法--冷酸酚法,其主要特点是:(1)使用可以破碎真核细胞但不影响细菌细胞完整性的SDS浓度,实现了从感染的细胞中快速分离完整的细菌,减少了宿主细胞RNA的污染;(2)在将细菌从细胞中分离的同时即利用苯酚-乙醇混合液将其总RNA快速固定,既减少了RNA的降解,又最大限度地保持了细菌在哺乳细胞内原有的表达模式;(3)可以从108个菌体中提取到至少30μg的总RNA,足够用于反转录等其他研究.该方法将为利用DNA Microarray技术进行的病原菌表达谱研究提供有益的借鉴.
病原菌全基因組錶達譜研究是闡明其緻病機理的必要的基礎,已經成為噹前生命科學領域的熱點和重點;然而由于難于從感染的組織中快速固定併分離細菌RNA,從而極大的製約瞭該研究的進展.介紹一種從感染的細胞中分離細菌RNA的方法--冷痠酚法,其主要特點是:(1)使用可以破碎真覈細胞但不影響細菌細胞完整性的SDS濃度,實現瞭從感染的細胞中快速分離完整的細菌,減少瞭宿主細胞RNA的汙染;(2)在將細菌從細胞中分離的同時即利用苯酚-乙醇混閤液將其總RNA快速固定,既減少瞭RNA的降解,又最大限度地保持瞭細菌在哺乳細胞內原有的錶達模式;(3)可以從108箇菌體中提取到至少30μg的總RNA,足夠用于反轉錄等其他研究.該方法將為利用DNA Microarray技術進行的病原菌錶達譜研究提供有益的藉鑒.
병원균전기인조표체보연구시천명기치병궤리적필요적기출,이경성위당전생명과학영역적열점화중점;연이유우난우종감염적조직중쾌속고정병분리세균RNA,종이겁대적제약료해연구적진전.개소일충종감염적세포중분리세균RNA적방법--랭산분법,기주요특점시:(1)사용가이파쇄진핵세포단불영향세균세포완정성적SDS농도,실현료종감염적세포중쾌속분리완정적세균,감소료숙주세포RNA적오염;(2)재장세균종세포중분리적동시즉이용분분-을순혼합액장기총RNA쾌속고정,기감소료RNA적강해,우최대한도지보지료세균재포유세포내원유적표체모식;(3)가이종108개균체중제취도지소30μg적총RNA,족구용우반전록등기타연구.해방법장위이용DNA Microarray기술진행적병원균표체보연구제공유익적차감.
