检验医学
檢驗醫學
검험의학
LABORATORY MEDICINE
2005年
5期
405-408
,共4页
李卫鹏%郑佐娅%王红%王从珠%杭勤%赵卫国
李衛鵬%鄭佐婭%王紅%王從珠%杭勤%趙衛國
리위붕%정좌아%왕홍%왕종주%항근%조위국
氨基末端B型钠尿肽%克隆%构建%纯化
氨基末耑B型鈉尿肽%剋隆%構建%純化
안기말단B형납뇨태%극륭%구건%순화
目的克隆人氨基末端B型钠尿肽(NT-proBNP)基因,构建原核表达载体并纯化其表达蛋白.方法用聚合酶链反应(PCR)从正常成人cDNA库中扩增出人NT-proBNP基因,将其克隆进pUCm-T中测定核苷酸序列.构建大肠杆菌分泌性表达载体pGEX-4T-3-NT-proBNP,IPTG诱导表达,GSH-agarose亲和纯化该表达蛋白.结果经PCR扩增成功获得228 bp的NT-proBNP基因,测序正确,在大肠埃希菌中融合表达后,该蛋白的表达量占菌体总蛋白的23%,用SDS-PAGE和Western blot鉴定大肠埃希菌中的表达产物,显示其相对分子质量为34 600.经亲和纯化后的GST-NT-proBNP的纯度可以达到95%,得率为1.7 mg/100 ml.结论 NT-proBNP基因的克隆、表达和纯化成功,为建立NT-proBNP检测方法奠定了基础.
目的剋隆人氨基末耑B型鈉尿肽(NT-proBNP)基因,構建原覈錶達載體併純化其錶達蛋白.方法用聚閤酶鏈反應(PCR)從正常成人cDNA庫中擴增齣人NT-proBNP基因,將其剋隆進pUCm-T中測定覈苷痠序列.構建大腸桿菌分泌性錶達載體pGEX-4T-3-NT-proBNP,IPTG誘導錶達,GSH-agarose親和純化該錶達蛋白.結果經PCR擴增成功穫得228 bp的NT-proBNP基因,測序正確,在大腸埃希菌中融閤錶達後,該蛋白的錶達量佔菌體總蛋白的23%,用SDS-PAGE和Western blot鑒定大腸埃希菌中的錶達產物,顯示其相對分子質量為34 600.經親和純化後的GST-NT-proBNP的純度可以達到95%,得率為1.7 mg/100 ml.結論 NT-proBNP基因的剋隆、錶達和純化成功,為建立NT-proBNP檢測方法奠定瞭基礎.
목적극륭인안기말단B형납뇨태(NT-proBNP)기인,구건원핵표체재체병순화기표체단백.방법용취합매련반응(PCR)종정상성인cDNA고중확증출인NT-proBNP기인,장기극륭진pUCm-T중측정핵감산서렬.구건대장간균분비성표체재체pGEX-4T-3-NT-proBNP,IPTG유도표체,GSH-agarose친화순화해표체단백.결과경PCR확증성공획득228 bp적NT-proBNP기인,측서정학,재대장애희균중융합표체후,해단백적표체량점균체총단백적23%,용SDS-PAGE화Western blot감정대장애희균중적표체산물,현시기상대분자질량위34 600.경친화순화후적GST-NT-proBNP적순도가이체도95%,득솔위1.7 mg/100 ml.결론 NT-proBNP기인적극륭、표체화순화성공,위건립NT-proBNP검측방법전정료기출.
