中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2006年
2期
174-177
,共4页
刘梅冬%张华莉%龚环宇%陈广文%王慷慨%鄂顺梅%肖献忠
劉梅鼕%張華莉%龔環宇%陳廣文%王慷慨%鄂順梅%肖獻忠
류매동%장화리%공배우%진엄문%왕강개%악순매%초헌충
HSF1%基因敲除%胚胎成纤维细胞%永生化%SV40T抗原
HSF1%基因敲除%胚胎成纖維細胞%永生化%SV40T抗原
HSF1%기인고제%배태성섬유세포%영생화%SV40T항원
目的:建立HSF1-/-,HSF1+/+两种基因型小鼠胚胎成纤维永生化细胞系,为HSF1的功能研究提供实验模型.方法:用脂质体介导的基因转染法将pSV3neo质粒导入HSF1-/-,HSF1+/+两种基因型小鼠胚胎成纤维细胞,经G418筛选,抗性克隆扩大培养,建立永生化细胞系;用PCR检测两种细胞株中目的基因的整合,用RT-PCR法鉴定SV40 T基因在转染细胞中的表达;用Western blot检测所建细胞株的诱导型热休克蛋白70的表达情况.结果:有3个细胞克隆已扩大培养稳定传代达6个月,经鉴定SV40 T抗原已整合到两种细胞中且稳定表达, HSF1-/-胚胎成纤维细胞热休克蛋白70的诱导表达消失.结论:成功建立永生化HSF1-/-,HSF1+/+两种基因型小鼠胚胎成纤维细胞.
目的:建立HSF1-/-,HSF1+/+兩種基因型小鼠胚胎成纖維永生化細胞繫,為HSF1的功能研究提供實驗模型.方法:用脂質體介導的基因轉染法將pSV3neo質粒導入HSF1-/-,HSF1+/+兩種基因型小鼠胚胎成纖維細胞,經G418篩選,抗性剋隆擴大培養,建立永生化細胞繫;用PCR檢測兩種細胞株中目的基因的整閤,用RT-PCR法鑒定SV40 T基因在轉染細胞中的錶達;用Western blot檢測所建細胞株的誘導型熱休剋蛋白70的錶達情況.結果:有3箇細胞剋隆已擴大培養穩定傳代達6箇月,經鑒定SV40 T抗原已整閤到兩種細胞中且穩定錶達, HSF1-/-胚胎成纖維細胞熱休剋蛋白70的誘導錶達消失.結論:成功建立永生化HSF1-/-,HSF1+/+兩種基因型小鼠胚胎成纖維細胞.
목적:건립HSF1-/-,HSF1+/+량충기인형소서배태성섬유영생화세포계,위HSF1적공능연구제공실험모형.방법:용지질체개도적기인전염법장pSV3neo질립도입HSF1-/-,HSF1+/+량충기인형소서배태성섬유세포,경G418사선,항성극륭확대배양,건립영생화세포계;용PCR검측량충세포주중목적기인적정합,용RT-PCR법감정SV40 T기인재전염세포중적표체;용Western blot검측소건세포주적유도형열휴극단백70적표체정황.결과:유3개세포극륭이확대배양은정전대체6개월,경감정SV40 T항원이정합도량충세포중차은정표체, HSF1-/-배태성섬유세포열휴극단백70적유도표체소실.결론:성공건립영생화HSF1-/-,HSF1+/+량충기인형소서배태성섬유세포.
